[發(fā)明專利]一種魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710582757.X
• 申請(qǐng)日: 2017-07-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107236999A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 不公告發(fā)明人
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 合肥威斯伏新材料有限公司
• 主分類號(hào): D01F4/00
• 分類號(hào): D01F4/00;D01F1/00;D01D1/02;D01D1/10
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物材料技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法。

背景技術(shù)

膠原是動(dòng)物組織中的一類結(jié)構(gòu)蛋白，約占總蛋白量的1/3，廣泛分布于動(dòng)物的皮膚、骨骼、軟骨、結(jié)締組織、腱、角膜、內(nèi)臟細(xì)胞間質(zhì)、肌腔、韌帶、鞏膜等部位。因其具有獨(dú)特的三股螺旋結(jié)構(gòu)、低抗原性、無(wú)毒性、良好的生物相容性和生物可降解性等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于組織工程支架材料、止血海綿、藥物控緩釋系統(tǒng)、基因傳遞載體、美容外科等生物醫(yī)用領(lǐng)域。但是，目前使用的膠原蛋白主要來(lái)源于豬皮、牛皮和豬骨、牛骨，近年來(lái)由于瘋牛病、口蹄疫等人畜交叉流行病的頻發(fā)，豬和牛中來(lái)源的膠原蛋白的應(yīng)用受到了限制。此外，在某些宗教人群中，豬來(lái)源的膠原蛋白被禁止使用。在這種情況下，水產(chǎn)膠原蛋白由于原料豐富、易于提取、低抗原性、低致敏性、高度可溶性、沒(méi)有傳染病危險(xiǎn)和宗教障礙而受到廣泛的關(guān)注。其中深海魚(yú)皮膠原蛋白，顧名思義就是以深海魚(yú)魚(yú)皮為原料提取的膠原蛋白。由于深海的低溫低壓，使這類膠原蛋白具有著普通的陸生動(dòng)物膠原蛋白和淡水魚(yú)、淺海魚(yú)膠原蛋白所不具備的特殊性質(zhì)。首先區(qū)別在于膠原蛋白活性激發(fā)的溫度。陸生動(dòng)物內(nèi)提取的膠原蛋白活性要在35度才能把活性全部激發(fā)。也就是說(shuō)要在35度以上吸收的效果才會(huì)達(dá)到最佳。而魚(yú)提取的活性激發(fā)溫度就要低很多，十度以上就能發(fā)揮最好的效果。

自組裝性是膠原的重要特性。通常，溶解于溶液中的膠原是游離的多肽鏈，而不是三股螺旋鏈。膠原通過(guò)自組裝能夠形成三股螺旋結(jié)構(gòu)，進(jìn)而形成纖維等，這是其在生物材料領(lǐng)域應(yīng)用的基礎(chǔ)。以往關(guān)于膠原自組裝性的研究多針對(duì)陸生哺乳動(dòng)物膠原，對(duì)水產(chǎn)膠原的探討較少。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法，本發(fā)明將魚(yú)皮膠原蛋白粉作為原料采用檸檬酸對(duì)其溶解反應(yīng)，最終通過(guò)自組裝形成纖維。

為解決現(xiàn)有技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的提供一種魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法，所述魚(yú)皮膠原自組裝成纖維的方法包括如下步驟：

（1）提取魚(yú)皮膠原粉；

（2）將所述步驟（1）中的魚(yú)皮膠原粉溶解于檸檬酸溶液中；

（3）對(duì)所述步驟（2）中的混合液進(jìn)行離心，取上清液；

（4）將所述步驟（3）中的上清液與醋酸緩沖液在冰浴中混合，攪拌均勻，調(diào)節(jié)溶液PH；

（5）將所述步驟（4）中的混合液在水浴鍋中水浴，即得自組裝體膠原纖維。

優(yōu)選地，所述魚(yú)皮膠原粉的制備方法包括如下步驟：

（1）取新鮮魚(yú)皮清洗，除雜；

（2）取清洗后的魚(yú)皮原料用濃度為0.16-3.0mol/L的氫氧化鉀溶液在0-20℃條件下浸泡1-20h，所加入的氫氧化鉀溶液與魚(yú)皮原料的體積重量比為10-20∶1，在浸泡過(guò)程中，每隔2-4h，更換浸泡用氫氧化鉀溶液1-2次；浸泡完畢后，清洗，過(guò)濾；清洗后向魚(yú)皮原料中加入有機(jī)溶劑浸泡2-6h，加清水，使魚(yú)皮原料與有機(jī)溶劑的質(zhì)量體積百分比為5-10％；

（3）取所述步驟（2）所得原料混合液，加入濃度為0.36-1.68mol/L的醋酸溶液在0-20℃的條件下進(jìn)行溶脹處理12-36h，所加入的醋酸溶液溶液與原料混合液的體積重量比為10-15∶1；然后在0-30℃條件下凍結(jié)1-10h；凍結(jié)完畢后，加入適量的0.15-0.45mol/L的醋酸溶液進(jìn)行打漿破碎，獲得粒徑2-4mm的顆粒料漿；

（4）向所述步驟（3）中的顆粒料漿中加入0.05-3.56mol/L的醋酸溶液進(jìn)行提取，所加入的醋酸溶液與顆粒料漿的體積重量比為15-30∶1，提取溫度0-25℃，提取時(shí)間為24-48h；提取完畢后，以60-80目紗網(wǎng)過(guò)濾，得提取液；向?yàn)V渣中加醋酸溶液，按上述操作重復(fù)提取1-2次，得提取液和濾渣，向提取液中加入1.5-2.5mol/L氯化鈉溶液進(jìn)行鹽析沉淀，沉淀干燥后即得魚(yú)皮膠原粉。

優(yōu)選地，所述檸檬酸溶液的制備方法包括如下步驟：

（1）質(zhì)料過(guò)濾除雜：制備橘汁，用壓濾機(jī)壓濾，對(duì)橘汁過(guò)濾除雜，得橘汁酸水；

（2）中和：把橘汁酸水加熱至60-75℃，逐步向其摻加碳酸鈣乳漿，持續(xù)加熱2-3h，初溫控制在5-8℃左右，最終可升高到90-100℃，至溶液呈青綠色時(shí)，即表明已完結(jié)中和，然后靜置沉淀，所得沉淀即為檸檬酸鈣；

（3）除鹽：所得檸檬酸鈣富含鹽分，用清水洗刷，加熱至60-70℃，重復(fù)2-3次，直至鹽分除凈停止，干燥得檸檬酸鈣漿液，備用；