[發(fā)明專利]一種定量測定尿液中甘膽酸的檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710581071.9
• 申請日: 2017-07-17
• 公開（公告）號: CN107389637A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙肅清;何綺怡;崔錫平;陳瑩珊;沈定
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東工業(yè)大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11227
• 代理人: 趙青朵

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及檢測分析技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種定量測定尿液中甘膽酸的檢測方法。

背景技術(shù)

甘膽酸(cholyglycine，簡稱CG)，別名N-(3,7,12-三羥基-24-羰基膽烷-24-基)-甘氨酸，是膽汁酸的主要成分之一，由膽酸與甘氨酸結(jié)合而成。甘膽酸是由肝細胞合成，同膽汁進入腸道，經(jīng)門靜脈再回到肝臟；當肝細胞受損時，肝細胞攝取甘膽酸的能力下降，致使血液中甘膽酸含量增加，因此，測定甘膽酸含量可以作為評價肝細胞功能及肝膽系統(tǒng)物質(zhì)循環(huán)功能的敏感指標之一，也是肝病患者肝功能受損程度及肝病治療恢復效果評價的靈敏度及特異性較好的指標之一。

臨床上檢測甘膽酸多取靜脈血，而針對一些小兒患者或不便于取靜脈血的患者，通常不便實施檢測。相關(guān)研究表明，膽汁酸經(jīng)腎臟排泄十分明顯，并與肝膽疾病程度相關(guān)，因此，檢測尿液中的甘膽酸對臨床有較大的指導價值，對于小兒患者和不便于靜脈取血的患者，也更方便實施檢測。

目前，常用的定量檢測方法主要是儀器檢測法和免疫法，其中，儀器檢測法包括薄層熒光法、高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和超高液相色譜法，這些測試方法需要大型儀器和復雜的樣品前處理；免疫法包括放射免疫法、化學發(fā)光免疫法和免疫透射比濁法等，這些方法中，有些會存在放射性污染，而且多數(shù)測試方法的測試結(jié)果解讀或者配套儀器也比較復雜，不適合家庭、個人乃至醫(yī)院使用。因此，建立一種操作簡單快捷、成本低廉的定量測定甘膽酸的檢測分析方法對于臨床中相關(guān)疾病的診斷及監(jiān)控具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種定量測定測試尿液中甘膽酸的檢測方法，本發(fā)明提供的檢測方法能夠簡便快捷、準確的測定尿液中甘膽酸含量。

本發(fā)明提供了一種定量測定尿液中甘膽酸的檢測方法，包括以下步驟：

a)將尿液待測樣、甘膽酸示蹤物工作溶液和甘膽酸多克隆抗體工作溶液混合、孵育，得到檢測樣；

其中，甘膽酸示蹤物具有式(Ⅰ)所示結(jié)構(gòu)：

甘膽酸多克隆抗體是由甘膽酸與牛血清蛋白偶聯(lián)所得的免疫抗原免疫兔子后所得的抗血清；

b)對所述檢測樣進行熒光偏振光檢測，獲得偏振光強度；

c)根據(jù)所述偏振光強度與預定的甘膽酸標準曲線，得到尿液待測樣中甘膽酸的濃度。

優(yōu)選的，所述步驟a)中，甘膽酸示蹤物工作溶液為以硼酸鹽緩沖液為稀釋劑，將甘膽酸示蹤物稀釋到一定稀釋度的稀釋液；

所述甘膽酸示蹤物工作溶液的稀釋度為1∶16000；

所述甘膽酸多克隆抗體工作溶液為以硼酸鹽緩沖液為稀釋劑，將甘膽酸多克隆抗體稀釋到一定稀釋度的稀釋液；

所述甘膽酸多克隆抗體工作溶液的稀釋度為1∶1000。

優(yōu)選的，所述步驟c)中，預設(shè)的甘膽酸標準曲線通過以下方式獲得：

用PBS緩沖液將甘膽酸配制成系列濃度的甘膽酸標準液；

對所述系列濃度的甘膽酸標準液、甘膽酸示蹤物工作溶液與甘膽酸多克隆抗體工作溶液經(jīng)混合孵育所得的系列總混合液進行熒光偏振光檢測，獲得系列總混合液的系列偏振光強度mP；

對PBS緩沖液、甘膽酸示蹤物工作溶液與甘膽酸多克隆抗體工作溶液經(jīng)混合孵育所得的總空白液進行熒光偏振光檢測，獲得總空白液的偏振光強度mP₀；

根據(jù)mP/mP₀的比值和相應的甘膽酸標準液的濃度，獲得甘膽酸標準曲線。

優(yōu)選的，所述甘膽酸示蹤物工作溶液中，硼酸鹽緩沖液的濃度為1～8mmol/L，PH值為7.0～8.5；

所述甘膽酸多克隆抗體工作溶液中，硼酸鹽緩沖液的濃度為1～8mmol/L，PH值為7.0～8.5。

優(yōu)選的，所述PBS緩沖液的濃度為0.01mol/L，PH值為7.4。

優(yōu)選的，所述步驟a)中，尿液待測樣、甘膽酸示蹤物工作溶液和甘膽酸多克隆抗體工作溶液的體積比為1：10：10。

優(yōu)選的，所述系列濃度的甘膽酸標準液、甘膽酸示蹤物工作溶液與甘膽酸多克隆抗體工作溶液混合孵育時，甘膽酸標準液、甘膽酸示蹤物工作溶液與甘膽酸多克隆抗體工作溶液的體積比為1：10：10；

PBS緩沖液、甘膽酸示蹤物工作溶液與甘膽酸多克隆抗體工作溶液混合孵育時，PBS緩沖液、甘膽酸示蹤物工作溶液與甘膽酸多克隆抗體工作溶液的體積比為1：10：10。

優(yōu)選的，所述甘膽酸示蹤物通過以下方式獲得：