[發明專利]白血病融合基因篩查檢測方法

在審

• 申請號: 201710580828.2
• 申請日: 2017-07-17
• 公開（公告）號: CN107217104A
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 劉紅星;滕文;王芳;張陽;陳雪
• 申請（專利權）人: 北京陸道培干細胞生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識產權代理有限公司11514
• 代理人: 安娜

1.一種白血病融合基因篩查檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1：將樣本分離的單個核細胞進行RNA提取，然后將RNA逆轉錄為cDNA；

S2：將所述cDNA稀釋后進行PCR反應；

S3：將所述PCR反應的產物進行電泳檢測，確定是否出現陽性條帶，從而判定是否存在白血病融合基因片段。

2.根據權利要求1所述的白血病融合基因篩查檢測方法，其特征在于，

所述S2中，所述PCR反應包括巢式第一輪PCR反應和巢式第二輪PCR反應，所述巢式第二輪PCR反應是以所述巢式第一輪PCR反應的產物作為反應原料。

3.根據權利要求2所述的白血病融合基因篩查檢測方法，其特征在于，所述S3具體包括：

將所述巢式第二輪PCR反應的產物進行電泳檢測，若所述電泳檢測無陽性條帶，結果為陰性，即不存在白血病融合基因片段；

若所述電泳檢測有陽性條帶，則將所述巢式第一輪PCR反應的產物進行分離PCR反應，將所述分離PCR反應的產物進行二次電泳檢測，根據電泳結果的比對結果判斷存在的白血病融合基因的類型。

4.根據權利要求3所述的白血病融合基因篩查檢測方法，其特征在于，所述S3中，所述電泳檢測為瓊脂糖凝膠電泳檢測，具體包括：

制備2.5％的瓊脂糖電泳用凝膠，用EB染色，然后取所述巢式第二輪PCR反應的產物10μL上樣，使用Marker I做分子量標記，150V電泳30min；判斷電泳后的瓊脂糖凝膠中是否出現陽性條帶。

5.根據權利要求3所述的白血病融合基因篩查檢測方法，其特征在于：

所述S3中，所述分離PCR反應的反應體系為20μL，其中2×PCR Mix10μL、水9μL和巢式第一輪PCR反應的產物1μL。

6.根據權利要求3所述的白血病融合基因篩查檢測方法，其特征在于，所述S3中，所述二次電泳檢測為瓊脂糖凝膠電泳檢測，具體包括：

制備2％的瓊脂糖電泳用凝膠，用EB染色，然后取所述分離PCR反應的產物10μL上樣，使用Marker I做分子量標記，150V電泳30min，根據電泳結果的比對結果判斷存在的白血病融合基因的類型。

7.根據權利要求2所述的白血病融合基因篩查檢測方法，其特征在于：

所述S2中，所述巢式第一輪PCR反應的反應體系為20μL，其中2×PCR Mix 10μL、水9μL和cDNA 1μL。

8.根據權利要求2所述的白血病融合基因篩查檢測方法，其特征在于：

所述S2中，所述巢式第二輪PCR反應的反應體系為20μL，其中2×PCR Mix 10μL、水9μL和巢式第一輪PCR反應的產物1μL。

9.根據權利要求1所述的白血病融合基因篩查檢測方法，其特征在于：

所述S2中，所述稀釋是將cDNA用等體積的Nuclease-Free水或pH值為8.0的TE稀釋。

10.權利要求1-9任一項所述的白血病融合基因篩查檢測方法在篩查白血病中的應用。