[發明專利]一種驢精液低溫保存的方法

有效

• 申請號: 201710575395.1
• 申請日: 2017-07-14
• 公開（公告）號: CN107183013B
• 公開（公告）日: 2021-01-19
• 發明（設計）人: 劉新峰;郭宏;丁向彬
• 申請（專利權）人: 天津農學院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 韓奎勇

本發明涉及一種驢精液低溫保存的方法，包括步驟：(1)按質量份數Tris 3.04份、檸檬酸1.70份、葡萄糖1.50份、果糖1.50份、青霉素0.06份，鏈霉素0.10份及雙蒸水100份制備基礎液，將基礎液85份，卵黃液15份制備精液稀釋液；(2)以發情母驢作為臺驢，假陰道法采集種公驢精液，活率大于0.70；(3)取溫度平衡至28℃的精液稀釋液和精液，按2:1的比例進行稀釋；(4)將稀釋好的精液裝于離心管后，置28℃水浴中轉移至4℃冰箱中；(5)低溫保存時每隔24小時進行混勻處理，同時鏡檢精子活率。采用本發明方法后精液保存時間明顯延長，解決了規?；B驢場在母驢集中發情時大量人工授精的困難，有效提高種公驢的利用效率。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別是一種驢精液低溫保存的方法。

背景技術

家畜精液保存結合人工授精技術可以極大地提高種公畜的繁殖利用效率。通常，哺乳動物精液的保存可分為常溫保存(15-25℃)、低溫保存(4℃)及冷凍保存(-196℃或-79℃)。常溫保存發展最早，方法也相對簡單，但常溫保存時間較短，且容易受微生物的污染，使精子活率顯著降低而影響受胎率。冷凍保存可以實現精子長期保存的目的，但冷凍保存精液較常溫和低溫保存而言，其方法比較復雜、所需儀器設備要求也較高，且解凍后精子活率較低，人工授精的受胎率也較低。低溫保存具有操作方法簡單，儀器設備要求不高，與常溫保存相比可明顯延長精液的保存時間，結合人工授精技術可顯著提高種公畜的利用效率。盡管如此，目前驢精液保存的相關研究較少，所以涉及到驢精液每種保存方式的方法和技術體系都還不完善。

驢為馬屬動物，且是長日照季節性發情動物，對于規?；B驢場，母驢的發情通常會集中出現，如果對種公驢實施現場采精，然后用稀釋液對采集的精液現場稀釋后再做人工授精，其操作時間相對緊張，給生產帶來了極大不便。如在長日照季節應用精液低溫保存液提前對采集的驢精液進行低溫保存，在母驢出現發情時便可直接進行人工授精，不僅給生產帶來了方便，而且有效的提高了種公驢的利用效率。因而，生產中亟需開展驢精液的低溫保存研究，建立一套適合生產中應用的驢精液低溫保存方法和技術體系。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種驢精液低溫保存的方法，解決規模化養驢場及其向周邊養驢戶在長日照季節母驢集中發情時段開展人工授精，提高種公驢的利用效率，加速品種改良。

本發明解決其技術問題是采取以下技術方案實現的：

一種驢精液低溫保存的方法，包括步驟如下：

(1)精液稀釋液的配置及處理

①基礎液的配置：所述基礎液包括按質量份數構成的下述組份：Tris 3.04份、檸檬酸1.70份、葡萄糖1.50份、果糖1.50份、青霉素0.06份，鏈霉素0.10份、雙蒸水100份，將上述組份定容配置成基礎液；

②卵黃液的制備：將1日齡雞蛋取蛋黃轉至50mL無菌離心管中，用去針頭無菌注射器反復吸吹，使蛋黃充分混合均勻，得新鮮卵黃液；

③用于低溫保存的精液稀釋液的配置及處理：按體積計取基礎液85份，新鮮卵黃液15份，充分混勻，在對精液稀釋前2小時，將精液稀釋液放于28℃恒溫培養箱中預熱備用；

(2)采精及精液預處理

以發情母驢作為臺驢，假陰道法采集種公驢精液，采集的精液立即用無菌紗布過濾并收集到無菌燒杯中并封口，同時以顯微鏡檢查精子密度和活率，密度正常且活率大于0.70以上方可應用，然后將封口的無菌燒杯置于28℃恒溫箱中，維持1-2小時達到精液的28℃平衡；

(3)精液稀釋

取溫度平衡至28℃的精液稀釋液和精液，按2:1的比例進行稀釋，輕輕混勻后得到稀釋精液備用；

(4)降溫處理