[發明專利]一種用于細胞培養的合成粘附培養基及其制備方法

有效

• 申請號: 201710574387.5
• 申請日: 2017-07-14
• 公開（公告）號: CN107119010B
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: 沈德良;張金盈;梁紅霞;唐俊楠;王勃;李靜;趙紅霞;劉闖;王佩文;靳之;崔新月
• 申請（專利權）人: 鄭州大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/0775;C12N5/0735
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 俞曉明

1.一種用于細胞培養的合成粘附培養基，其特征在于，每升合成粘附培養基中含有以下組分：生物素0.08g、皮質酮20μg、L-肉毒堿2g、亞油酸1.2g、乙醇胺1.2g、亞麻酸0.8g、D-葡萄糖13-17g、孕酮5μg、丙酮酸鈉1.2g、視黃醇乙酸酯0.08g、過氧化氫酶4g、葉酸0.9-1.2g、還原型谷胱甘肽0.8-1.3g、硫辛酸60-70μg、轉鐵蛋白2-3g、人胰島素6-8g、亞硒酸鈉0.1mg、香蕉皮提取物500-600mL、萘乙酸1.2-2g、維生素C 0.8-1.5g；

所述香蕉皮提取物是香蕉皮115℃下焙炒10-20min后，再經含有維生素B12和維生素B1的溶液浸泡、過濾收集得到的濾液；

所述細胞為人體心臟組織細胞、人體骨髓干細胞或者小鼠胚胎干細胞。

2.根據權利要求1所述的用于細胞培養的合成粘附培養基，其特征在于，每升合成粘附培養基中含有以下組分：生物素0.08g、皮質酮20μg、L-肉毒堿2g、亞油酸1.2g、乙醇胺1.2g、亞麻酸0.8g、D-葡萄糖15g、孕酮5μg、丙酮酸鈉1.2g、視黃醇乙酸酯0.08g、過氧化氫酶4g、葉酸1g、還原型谷胱甘肽1.0g、硫辛酸65μg、轉鐵蛋白2.5g、人胰島素7g、亞硒酸鈉0.1mg、香蕉皮提取物550mL、萘乙酸1.5g、維生素C1.2g。

3.根據權利要求1所述的用于細胞培養的合成粘附培養基的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

步驟1，制備香蕉皮提 取物

步驟1.1，收集新鮮的香蕉皮，115℃下焙炒10-20min，得到碳化香蕉皮；

步驟1.2，按以下配方制備浸泡液，其中每升浸泡液中含有以下組分：0.3-0.5g的維生素B12、1-2g的維生素B1，余量為蒸餾水；

步驟1.3，將所述碳化香蕉皮與浸泡液按照1:10的質量比例混合，超聲提取30-50min，然后經孔直徑為1-3μm的濾紙過濾，得到香蕉皮提 取物；

步驟2，每升用于細胞培養的合成粘附培養基按照以下步驟制備：

步驟2.1，稱取生物素0.08g、皮質酮20μg、L-肉毒堿2g、亞油酸1.2g、乙醇胺1.2g、亞麻酸0.8g、D-葡萄糖13-17g、孕酮5μg、丙酮酸鈉1.2g、視黃醇乙酸酯0.08g、過氧化氫酶4g、葉酸0.9-1.2g、還原型谷胱甘肽0.8-1.3g、硫辛酸60-70μg、轉鐵蛋白2-3g、人胰島素6-8g、亞硒酸鈉0.1mg、香蕉皮提取物500-600mL、萘乙酸1.2-2g、維生素C 0.8-1.5g；

步驟2.2，將步驟2.1中稱取的各組分混合后，震蕩攪拌，充分溶化各組分，然后將得到的溶液經孔直徑為0.22μm的濾菌膜過濾除菌，得到用于細胞培養的合成粘附培養基。

4.根據權利要求3中所述的用于細胞培養的合成粘附培養基的制備方法，其特征在于，所述超聲提取的超聲波頻率為20kHz，功率為500W。