[發明專利]一種蜜蜂卵超低溫冷凍方法及其配套工具

有效

• 申請號: 201710573747.X
• 申請日: 2017-07-14
• 公開（公告）號: CN107372361B
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 李志勇;薛運波;牛慶生;李興安;葛鳳晨;王志;常志光;柏建民
• 申請（專利權）人: 吉林省養蜂科學研究所（吉林省蜂產品質量管理監督站;吉林省蜜蜂遺傳資源基因保護中心）
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033
• 代理公司: 馬鞍山市金橋專利代理有限公司 34111
• 代理人: 楊濤

1.一種蜜蜂卵超低溫冷凍方法，其特征在于，包括下述步驟：

(1)蜂卵獲取：將蜂王裝入蜂王產卵控制籠內，送入蜂群，囚禁蜂王控制籠內產卵，次日取出產有蜂卵的臺基條備用；

(2)蜂卵收集：將產有蜜蜂卵的臺基條固定到木質支架上，用滴管吸取預先配制好的生理液，逐滴滴加到粘有蜂卵的臺基上，將卵覆蓋，用卵的塑料剝離針在20倍體式顯微鏡下將生理液內的蜂卵逐粒剝離臺基，使卵懸浮于液體內，再將該臺基條立于一潔凈培養皿內，用吸有生理液的滴管將剝離的蜂卵全部沖入培養皿內，逐條沖洗，將所有蜂卵都收集到該培養皿內；

(3)蜂卵滲透平衡：用滴管吸取培養皿內收集到一起的蜂卵，將其加入到平衡漏斗內，打開止水夾，生理液流出至廢液皿，關閉止水夾，依次加入適量的蜂卵梯度滲透液一，分別滲透處理一定時間，使蜂卵脫水和滲透平衡，最后加入蜂卵冷凍保護液繼續平衡；

(4)蜂卵凍前準備：在3L的廣口玻璃內膽保溫瓶內加入一定量制冷的液氮，將玻璃化冷凍滴凍盤懸于液氮之上，通過調節提鉤位置，使盤體距離液氮面適當高度位置，降溫平衡后用于蜂卵的滴凍；

(5)蜂卵滴凍：用滴管吸取懸有蜂卵的冷凍保護液，逐滴滴入玻璃化冷凍滴凍盤上的圓形凹陷內，冷凍保護液會迅速冷凍進入玻璃化狀態；

(6)蜂卵集中凍存：將玻璃化冷凍的蜂卵集中入凍存管內密封并標記，投入到液氮內長期保存；

(7)蜂卵解凍與復水：取出裝有蜂卵的凍存管，升溫平衡一定時間后，將玻璃態顆粒投入解凍液內，迅速解凍，再將懸浮有蜂卵的解凍液轉移入平衡漏斗內，將蜂卵集中，依次加入適量的蜂卵梯度滲透液二，分別滲透處理一定時間，使蜂卵吸水和滲透復原，最后加入蜂卵生理液繼續復水；

(8)蜂卵移植和培養：用配有進樣器的塑料吸持針吸持住經過檢驗合格的蜜蜂卵的頭部，將其移動并立于臺基條的臺基上，所有蜂卵移植完畢后，將臺基條固定到蜂卵培養盒內，并將培養盒置于恒溫恒濕培養箱中，調節適宜的溫濕度進行蜂卵培養；

所述木質支架的上部中間開具一條長130mm、寬3.5mm、深5.0mm的凹槽；卵的脫水/復水平衡裝置包括平衡漏斗、漏斗架、篩網、滴管、止水夾和廢液皿，所述平衡漏斗固定在漏斗架上，所述篩網安裝在平衡漏斗內，所述止水夾固定在平衡漏斗的底部，所述漏斗架的底部放置在廢液皿內；所述玻璃化冷凍滴凍盤包括盤體、提柄和提鉤，所述提柄連接于盤體的側面，所述提鉤滑動連接在提柄的下部，所述盤體上設有若干圓形凹陷；所述圓形凹陷的直徑為6mm；所述蜂卵培養盒包括盒體和固定架，所述盒體的一側設有開口，所述固定架豎直固定在盒體的內壁上，且固定架上設有若干用于卡接臺基條的卡口；所述盒體的側面形狀為梯形；所述固定架的數量為2個。