[發明專利]用于鑒別國家級茶樹良種‘迎霜’的分子特異性標記引物及其鑒別方法有效
| 申請號： | 201710573478.7 | 申請日： | 2017-07-14 |
| 公開（公告）號： | CN107190082B | 公開（公告）日： | 2018-03-23 |
| 發明（設計）人： | 徐艷霞;陳亮;姚明哲;郝萬軍;陳瑋;沈思言 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院茶葉研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙)33240 | 代理人： | 黃前澤 |
| 地址： | 310000 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 鑒別 國家級 茶樹 良種 迎霜 分子 特異性 標記 引物 及其 鑒別方法 | ||
【權利要求書】：
1.茶樹品種‘迎霜’的分子特異性標記引物，其特征在于該特異性引物序列如下：
上游引物S4YSF：5’-TGAGCTGAGTGAGTTGAA-3’,如SEQ ID NO.1所示；
下游引物S4YSR：5’-GTCGGTACTGACTATGAA-3’,如SEQ ID NO.2所示。
2.一種利用權利要求1所述的分子特異性標記引物S4YSF/S4YSR對茶樹品種‘迎霜’進行快速鑒別的方法，其特征在于所述方法為：
(1)提取待測茶樹品種的基因組DNA；
(2)以步驟(1)提取的待測樣品DNA為擴增模板，以所述分子特異性標記引物作為擴增引物，進行PCR擴增；
(3)對步驟(2)的PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，若電泳結果出現1346bp大小的特異性片段，則待測樣品為迎霜，反之則不是。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于所述的PCR擴增體系：1μl濃度為10μM的上游引物S4YSF，1μl濃度為10μM的下游引物S4YSR，10μlPCR SuperMix，1μl濃度為50ng/μl的模板DNA，7μl ddH2O；總體積為20μl。
4.如權利要求2所述的方法，其特征在于所述的PCR擴增程序為：94℃預變性5min；94℃變性50s，57℃退火50s，72℃延伸1.5min,共32個循環；最后，72℃延伸10min。
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