[發明專利]分離純化非達霉素的方法

有效

• 申請號: 201710572651.1
• 申請日: 2017-07-14
• 公開（公告）號: CN109251229B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 王欣榮;翟龍飛;褚以文;傅慧垚;張君利;詹良靜;張新宜;林家富;劉超蘭
• 申請（專利權）人: 成都大學
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/06
• 代理公司: 成都立信專利事務所有限公司 51100
• 代理人: 馮忠亮

本發明為分離純化非達霉素的方法，解決已有分離純化非達霉素的方法存在分離步驟多，生產成本高，回收率較低的問題。本發明所述的方法包括如下步驟：(1)含有非達霉素的粗品用有機溶劑溶解,加入堿溶液洗滌，有機相用干燥劑干燥后,減壓濃縮得濃縮物；（2）步驟（1）得到的濃縮物過聚酰胺柱,梯度洗脫,收集含非達霉素的洗脫液,減壓濃縮后結晶得到得白色粉末狀非達霉素純品，所得的非達霉素純度在97%以上，總收率達到75%以上。本發明的方法能夠得到高純度的非達霉素,步驟少，工藝簡單易行，收率高,環境友好,非常適合商業化生產。

技術領域

本發明涉及藥物化學領域的應用，具體涉及一種高效分離純化非達霉素的方法。

背景技術

非達霉素（Fidaxomicin）是由多種微生物發酵產生的次級代謝產物，又名臺勾霉素B（Tiacumicin B）,其分子式為C₅₂H₇₄Cl₂O₁₈,其主要通過抑制細菌的RNA聚合酶二迅速產生抗難治梭狀芽孢桿菌感染（CDI）的作用，優于萬古霉素等現有藥物，具有更低的復發率。

中國發明專利CN104846043A公開了制備非達霉素的方法，該發明提供了一種從發酵液中分離和純化非達霉素的工藝,包括：放線菌桔橙指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacum hamdenensis亞種NRRL18085菌株發酵結束后,極性有機溶劑浸提菌絲體；浸提液濃縮后過大孔吸附樹脂柱,收集含有非達霉素的解析液；解析液濃縮后用有機溶劑萃取；萃取液濃縮后經正向柱層析,得到非達霉素粗品；該粗品經高壓制備液相色譜設備,用含水的極性溶劑作為流動相、并添加酸或酸性鹽調節pH,收集含有高純度非達霉素的流出液；該洗脫液過聚苯乙烯微球樹脂柱；洗脫液濃縮、萃取、萃取液干燥后濃縮,真空干燥,得白色粉末狀非達霉素純品。該發明經過浸提、大孔樹脂吸附、萃取、正向柱層析、苯乙烯微球柱、萃取和真空干燥等七步分離純化過程，生產周期長，容易造成產品出現降解產物，純度低，總收率也無法得以提高。

中國發明專利 CN104418925A、CN104098637A和 CN103320355A等專利均描述了采用極性溶劑從微生物菌絲中浸提，大孔樹脂分離和制備柱層析等過程進行分離純化非達霉素的方法。由于微生物發酵過程的復雜性，通常經過溶媒浸提，在分離出目標產物的同時，也將菌絲中的油脂一同提取出來。浸提物進入下一步大孔吸附樹脂時，這些油脂會吸附到樹脂上，使樹脂交換容量大大降低；洗脫非達霉素拖尾嚴重，不能實現非達霉素與雜質的有效分離，需增加額外步驟除去雜質；再生樹脂時將油脂去除需耗費大量溶劑。以上專利均采用了制備柱層析進一步分離非達霉素的雜質，生產成本高，不利于大規模生產。

綜上，對于從具有復雜成分的發酵菌絲體中分離純化非達霉素，要實現步驟少，溶媒低消耗，低成本的目標,仍然是一個期待解決的問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種分離步驟少，生產成本低，產品純度高、回收率高的分離純化非達霉素的方法。

本發明是這樣實現的：

一種分離純化非達霉素的方法，包括以下步驟：

a.溶解：將含有非達霉素的粗品用有機溶劑充分溶解，過濾后得粗品溶液；

b.洗滌:將適當體積的堿溶液加入步驟a得到的粗品溶液，二者體積比為1:9到7:3；兩相充分混合，分層，有機相加入干燥劑干燥后，減壓濃縮得濃縮物；

c.層析: 步驟b得到的濃縮物溶解后上樣至聚酰胺柱,以有機溶劑水溶液和酸水的混合溶劑梯度洗脫,收集含有非達霉素的洗脫液；流速控制在0.2～2.5BV/h；

d.濃縮及干燥:將分段收集到的含非達霉素洗脫液減壓濃縮后結晶，真空干燥得到純品。