[發明專利]一種從好氧顆粒污泥中高效提取群體感應信號分子的方法

有效

• 申請號: 201710571656.2
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107515143B
• 公開（公告）日: 2019-10-01
• 發明（設計）人: 張智明;俞卓棟;朱亮;徐向陽
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/40
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;傅朝棟

1.一種從好氧顆粒污泥中提取群體感應信號分子的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：分別利用α-淀粉酶、β-淀粉酶、蛋白酶K、脂肪酶水解好氧顆粒污泥樣品，分別測量水解后污泥樣品的MLVSS；然后等量移取不同酶水解后的好氧顆粒污泥樣品，利用L₉(3⁴)正交表通過正交實驗方法，設置反應時間30-50min，以酶解反應結束胞外多糖的釋放量為單一指標確定酶促反應最佳條件，取各酶促反應最佳條件下反應結束的泥水混合物，離心收集上清液后經液液萃取、減壓蒸餾、氮吹定容后測定各類信號分子濃度，取信號分子含量最高一組對應的水解酶作為最佳水解酶；

步驟2：取最佳水解酶在其最佳酶促反應條件下水解好氧顆粒污泥樣品后得到的泥水混合物，利用高速冷凍離心機對混合物進行離心分離；

步驟3：取離心分離后的上清液置于梨形分液漏斗中，加入有機溶劑作為萃取劑，利用分液漏斗振蕩器進行低速振蕩，萃取重復若干次，收集有機相；

步驟4：通過旋轉蒸發儀連續進料口將收集的有機相吸入蒸發瓶中至有機相蒸干，取萃取劑充分洗滌蒸發瓶若干次，洗滌液體收集至離心管中；

步驟5：將所述離心管置于氮吹儀上，氮吹過程中不斷調節氮吹針高度，使離心管內液面處于震動狀態，直至離心管內液體吹干；然后利用溶劑對氮吹后的固體進行定容，完成好氧顆粒污泥中群體感應信號分子的提取和富集。

2.如權利要求1所述的從好氧顆粒污泥中提取群體感應信號分子的方法，其特征在于，步驟2的離心分離過程中，以10000-20000rpm轉速在2-8℃下離心20-30min。

3.如權利要求1所述的從好氧顆粒污泥中提取群體感應信號分子的方法，其特征在于，步驟3中所述的有機溶劑包括二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯。

4.如權利要求1所述的從好氧顆粒污泥中提取群體感應信號分子的方法，其特征在于，步驟3中所述離心上清液與有機溶劑的混合體積比為1:(1-2)。

5.如權利要求1所述的從好氧顆粒污泥中提取群體感應信號分子的方法，其特征在于，步驟3的每次振蕩萃取過程中，分液漏斗振蕩器以100-200rpm低速振蕩5-10min，以防止乳化。

6.如權利要求1所述的從好氧顆粒污泥中提取群體感應信號分子的方法，其特征在于，步驟4有機相蒸發過程中，設置旋轉蒸發儀的減壓蒸餾溫度為30-40℃，壓力為500-800mbar。

7.如權利要求1所述的從好氧顆粒污泥中提取群體感應信號分子的方法，其特征在于，步驟5的氮吹過程中，氮氣流量控制在1.0-3.0 L/min。