[發(fā)明專利]利用cpDNA序列進行榛種質鑒定的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710571443.X
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107312848B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發(fā)明（設計）人: 趙天田;王貴禧;梁麗松;馬慶華
• 申請（專利權）人: 中國林業(yè)科學研究院林業(yè)研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;G16B30/10
• 代理公司: 北京凱特來知識產權代理有限公司 11260
• 代理人: 鄭立明;趙鎮(zhèn)勇

本發(fā)明公開了一種利用cpDNA序列進行榛種質鑒定的方法，利用3對葉綠體cpDNA引物對標準種質進行PCR擴增，利用3對引物對待鑒定的目標種質進行PCR擴增，將得到的目標種質的擴增序列與標準種質的擴增序列進行比對，根據比對結果是否一致進行榛種質鑒定，利用的cpDNA序列標記鑒別能力強、重復性好，能夠有效的鑒別易混淆榛種質資源或其他屬植物，對我國榛屬植物資源的種間分類、親緣關系分析及遺傳進化分析提供了重要的技術支撐。

技術領域

本發(fā)明涉及一種榛種質鑒定的方法，尤其涉及一種利用cpDNA序列進行榛種質鑒定的方法。

背景技術

榛為榛科(Corylaceae)榛屬(Corylus)植物，在這些榛種中既包含有喬木類型也涵蓋灌木類型(張宇和等，2005)。世界榛屬植物約有20個種，廣泛地分布在北半球的亞洲、歐洲、北美洲的溫帶地區(qū)。我國榛屬植物資源豐富，我國天然分布的有8個種和2個變種，分布范圍也很廣泛，經濟利用價值較高。

20世紀50年代以來，我國榛屬植物的分類仍是完全依據形態(tài)特征進行劃分，不同分類學家由于基于的形態(tài)尺度和依據的標準不同，因而分類結果不盡相同。尤其對于我國榛屬植物種與變種的劃分，分類學家們存在很多分歧。胡先嘯(1948)在撰寫的《中國樹木圖志》中首次提出中國榛屬植物應屬于榛科(Corylaceae)榛屬(Corylus)，其中包括6個種2個變種。陳嶸(1975)在《中國樹木分類學》中認為中國榛屬植物應劃分成3個種和3個變種。俞德浚(1979)在《中國果樹分類學》中將中國榛屬植物劃分成4個種2個變種。《中國植物志》(1979版)將我國榛屬植物劃分了7個種2個變種，并首次提及1個存疑種。鄭萬鈞(1985)在《中國樹木志》中介紹中國榛屬植物包含7個種和3個變種。梁維堅(1988，2005)認為川榛應是一個獨立的種，并認定了具有典型短柄特征的川榛變種短柄川榛。由此可見，植物分類學家對我國榛屬植物的分類存在很多爭議，對榛屬植物資源種類記載不一，分類地位不明確，這對我國榛屬植物資源的收集、保存及利用造成一定的影響，進而影響榛屬植物雜交育種工作的開展。

葉綠體基因組(cpDNA)相當保守，而且有獨立的進化路線，不依賴其他任何數據即可構建分子進化樹，可在較低的分類階元上(如種間)解決植物分類鑒別問題。這克服了傳統(tǒng)研究方法的弱點，提高了植物種質資源鑒別的水平。

現有技術一：

形態(tài)學標記是以植物的表型性狀為遺傳標記，目前的榛屬植物分類主要依靠形態(tài)學的研究，依賴于表型的差異。從遺傳角度看，表型性狀分為數量性狀和質量性狀兩類。但是表型性狀受環(huán)境、氣候、營養(yǎng)狀況等多種因素影響，往往提供的信息不夠全面，且依據形態(tài)進行鑒別分類工作量大、周期長、成本高。例如：川榛和平榛兩者在樹形、葉片、花序及果實形態(tài)上非常相似，不易區(qū)分，尤其是在兩者交叉分布地帶經常混淆，給科研調查和生產利用帶來了很大困擾。又如，虎榛子屬的虎榛子和榛屬的毛榛在表型上也非常相近，不易區(qū)分。

現有技術二：

隨著分子標記的快速發(fā)展，像RFLP標記(Restriction fragment lengthpolymorphism)，隨機擴增多態(tài)性RAPD(Random amplification polymorphism DNA)、簡單重復序列SSR(Simple sequence repeats)、擴增片段長度多態(tài)性AFLP(amplifiedfragment length polymorphism)、序列標簽位點STS(sequence-tagged site)等，用于木本植物的分類鑒別中。但這些分子標記方法都有一定的缺陷，如RFLP標記操作繁瑣，技術要求高，價格也較高；RAPD標記分析的結果并不是非常準確；SNP標記信息位點有限，成本昂貴等。

上述標記大多是基于無全基因組序列信息的技術開發(fā)出來，有一定的應用價值，但隨機性強、穩(wěn)定性較差。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種利用cpDNA序列進行榛種質鑒定的方法。