[發明專利]CBF?AMLc?kit基因突變檢測用的PCR擴增引物、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201710570941.2
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107287322A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 于世輝;毛琳琳;胡昌明;周丹燕;徐艷艷;劉晶星;歐小華;趙薇薇
• 申請（專利權）人: 廣州金域醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司44224
• 代理人: 林青中

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，尤其是涉及一種CBF-AML c-kit基因突變檢測用的PCR擴增引物、試劑盒及檢測方法。

背景技術

CBF-AML(Core binding factor acute myeloid leukemia，核心結合因子急性髓細胞樣白血病)是指伴隨有t(8；21)(q22；q22)或inv(16)(p13.1；q22)/t(16；16)(p13.1；q22)重現性遺傳學異常的AML(Acute myeloid leukemia，急性髓細胞樣白血病)，約占全部AML的15％。一般認為CBF-AML患者有較好的預后，但僅有50％的患者可被治愈，CBF-AML患者預后狀況的不同與病人個體之間的基因異質性具有較大的關系。

c-kit基因定位于人類染色體4q11-12，為原癌基因，編碼145kD的跨膜蛋白，隸屬于第Ⅲ類酪氨酸激酶受體家族。在約有30％的AML患者中存在c-kit基因的獲得性突變，主要發生于exon 8和17。研究發現，c-kit基因的突變與AML患者的不良預后密切相關，尤其是發生于exon 17上的突變。c-kit基因的突變研究對CBF-AML患者預后具有重要的參考意義。

發明內容

基于此，有必要提供一種CBF-AML c-kit基因突變檢測用的PCR擴增引物、試劑盒及檢測方法。

一種CBF-AML c-kit基因突變檢測用的PCR擴增引物，包括第一擴增引物對和/或第二擴增引物對；其中，所述第一擴增引物對中兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，所述第二擴增引物對中兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。

第一擴增引物對和第二擴增引物對的詳細信息見下表。

在其中一個實施例中，所述CBF-AML c-kit基因突變檢測用的PCR擴增引物包括所述第一擴增引物對和所述第二擴增引物對。

一種CBF-AML c-kit基因突變檢測用的試劑盒，含有上述任一實施例所述的PCR擴增引物。

在其中一個實施例中，所述PCR擴增引物在擴增體系中的使用濃度是10μM。

當所述PCR擴增引物包括第一擴增引物對和第二擴增引物對時，兩個擴增引物對分別制成擴增引物試劑，也即擴增引物試劑有兩種，分別是含有第一擴增引物對的第一擴增引物試劑和含有第二擴增引物對的第二擴增引物試劑，每種擴增引物試劑中均含有相應的兩條引物，濃度均為100μM。擴增引物試劑可存放于-20℃環境中，在使用時配制成引物濃度為10μM的溶液，于4℃保存即可。

在其中一個實施例中，所述CBF-AML c-kit基因突變檢測用的試劑盒還含有測序引物對，所述測序引物對中兩條引物的序列分別如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。

測序引物對的詳細信息見下表。

引物名稱引物序列(5’→3’)SEQ ID NO:M13FTGTAAAACGACGGCCAGT5M13RCAGGAAACAGCTATGACC6

在其中一個實施例中，所述測序引物對在擴增體系中的使用濃度是10μM。

測序引物對可制成測序引物試劑的形式，存放于-20℃環境中，在使用時配制成引物濃度為10μM的溶液，于4℃保存即可。