[發(fā)明專利]一株產(chǎn)朊假絲酵母及其在發(fā)酵產(chǎn)蛋白中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710570342.0
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107641602B
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 常興
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇黑鉆生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N13/00;C12P21/00;C12R1/72
• 代理公司: 南京新慧恒誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32424
• 代理人: 王月霞

本發(fā)明公開了一株產(chǎn)朊假絲酵母及其在發(fā)酵產(chǎn)蛋白中的應(yīng)用，所述菌株分類命名為產(chǎn)朊假絲酵母（Candida utilis）YHC?007，已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC，保藏編號：CCTCC NO：M 2017403。所述菌株可大幅度提高發(fā)酵產(chǎn)物中蛋白的產(chǎn)量，并且遺傳穩(wěn)定性好，連續(xù)傳代5次后效價并無明顯改變。在500L發(fā)酵罐中，發(fā)酵產(chǎn)量幾乎沒有下降。本發(fā)明菌株完全符合工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)蛋白的技術(shù)指標，可用于工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)，有重大的社會科研意義和經(jīng)濟價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株產(chǎn)朊假絲酵母及其在發(fā)酵產(chǎn)蛋白中的應(yīng)用，屬于微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

酵母是一類繁殖較快的微生物，往往在1~3h就可以擴繁一倍，同時酵母的發(fā)酵底物也比較廣，包括如糖蜜等各種低成本原料。在發(fā)酵的終產(chǎn)物中，每克活性酵母可達200億以上 , 其蛋白質(zhì)質(zhì)量含量一般低于50%。因此，利用酵母的快速繁殖能力和高蛋白特性,生產(chǎn)廉價的蛋白飼料受到人們的關(guān)注。

我國開發(fā)研究生物飼料蛋白已有多年歷史,利用秸稈、鼓皮、酒糟等廢棄物生產(chǎn)生物酵母蛋白，近年來研究者們也采用氨基酸廢液來生產(chǎn)酵母蛋白; 國外(日本、俄羅斯等)雖然有研究報道, 但也尚未見工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明菌株采用的離子束誘變育種是一種交叉物理學(xué)和生物學(xué)的新型誘變方式，和經(jīng)典誘變方法相比，在遺傳穩(wěn)定性，誘變頻率性上有巨大優(yōu)勢。同時采用糖蜜、玉米漿等工業(yè)廢棄原材料進行發(fā)酵，最終獲得的假絲狀酵母蛋白質(zhì)質(zhì)量含量可達75%，發(fā)酵時間縮短到24h以內(nèi)，大大優(yōu)于國內(nèi)外相關(guān)生產(chǎn)標準。

經(jīng)過相關(guān)文獻、專利的檢索，國內(nèi)外利用這一思路篩選低產(chǎn)朊假絲酵母發(fā)酵產(chǎn)高蛋白的相關(guān)技術(shù)和方法尚無報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株產(chǎn)朊假絲酵母及其在發(fā)酵產(chǎn)蛋白中的應(yīng)用，誘變方法簡單、高效、安全，相較于出發(fā)菌種，發(fā)酵周期短，蛋白質(zhì)質(zhì)量含量大大提高，達到75%以上，同時減少生產(chǎn)成本，簡化生產(chǎn)工藝。

為了達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一株產(chǎn)朊假絲酵母，其分類命名為產(chǎn)朊假絲酵母（Candida utilis）YHC-007，已于2017年 6月 30日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC，地址：中國 武漢 武漢大學(xué)，保藏編號：CCTCC NO：M2017403。

本發(fā)明所述的產(chǎn)朊假絲酵母的篩選方法是：將土壤中篩選的的產(chǎn)朊假絲酵母細胞懸浮液經(jīng)低能氮離子注入誘變后，通過平板篩選出生長狀況良好的菌株，再通過搖瓶發(fā)酵復(fù)篩獲取作為下一輪誘變的出發(fā)菌株，重復(fù)上述誘變過程，最后篩選出符合工業(yè)應(yīng)用的目標菌株產(chǎn)朊假絲酵母YHC-007。

本發(fā)明菌株的形態(tài)學(xué)及生理化學(xué)特征如下：

菌落顏色：乳白色；

需氧方式：兼性好氧；

菌落大小：3~8μm；

適宜生長溫度：28~35℃；

適宜生長pH：6.0~7.0；

菌落形態(tài)：橢圓形；

革蘭氏染色：陰性。

本發(fā)明所提供的產(chǎn)朊假絲酵母篩選誘變方法，具體步驟如下

（a)、細胞懸浮液制備：將平板上培養(yǎng)的產(chǎn)朊假絲酵母制成細胞懸液，調(diào)整濃度為10⁶/毫升。

（b)、低能氮離子注入誘變：取0.1 mL的步驟(a)中細胞懸浮液均勻涂布于無菌平皿上，以無菌風(fēng)吹干，在20~30 KeV，注入劑量為5.0×10¹⁴~25.0×10¹⁴ ions/cm³下對其進行氮離子注入。