[發明專利]一種抑制素B測定試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201710568443.4
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107389952A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 胡鹍輝;夏福臻;錢純亙;張賽;吳力強;宋永波
• 申請（專利權）人: 深圳市亞輝龍生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/531;G01N33/532
• 代理公司: 深圳市千納專利代理有限公司44218
• 代理人: 袁燕清

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及一種抑制素B測定試劑盒及其制備方法。

背景技術

抑制素B(inhibin B,INH-B)是睪丸來源的糖蛋白激素，成年男性體內血清抑制素B水平與FSH呈顯著負相關，對FSH起負反饋作用。男性出生后不久，血清抑制素B水平逐漸上升，抑制素B與FSH之間一直維持負相關關系，20~30歲時，抑制素B水平到達高峰，此后抑制素B水平隨年齡增加逐漸降低。生精功能低下與生精阻滯男性血清抑制素B水平顯著低于正常生精功能男性，唯支持細胞綜合征（SCO）男性血清抑制素B水平極低，SCO的發生與血清抑制素B的水平顯著相關，血清抑制素B的水平還與睪丸體積、精子總數顯著相關。抑制素B水平反映了整個睪丸組織的功能，是輸精管道的直接產物，成年男性血清中維持可檢測的抑制素B水平需要生精細胞的存在，因此抑制素B被認為是男性精子發生的血清標志物。

血清抑制素B測定可用于評價男性不育病人的生精功能，兒童隱睪、性早熟的診斷，對非阻塞性無精子癥病人睪丸精子抽吸的預測，監測放、化療對男性生精功能的損傷等。

目前，國內外用于INHB檢測采用的方法原理主要有免酶聯免疫法、化學發光法和膠體金法：化學發光需要專用分析儀，且價格昂貴，酶聯免疫法大多采用96微孔板檢測，步驟繁瑣耗時，膠體金法操作簡單、使用方便、檢測速度快。

發明內容

本試劑盒采用的基本原理為免疫膠體金層析法。試紙條上的檢測帶（T）包被有與待檢物相對應的抗INHB抗體，在對照帶（C）包被抗親和素抗體，在偶合物墊上包被有膠體金標記的抗INHB抗體和膠體金標記的親和素。檢測時，當樣本中含有待檢物時，樣本中的待檢物與膠體金抗體偶合物形成免疫復合物，隨后免疫復合物上的待檢物被捕獲并固定在硝基纖維素膜上形成一條紅色的檢測帶（T），同時，偶合物墊上的親和素標記物流經對照區（C）并被已固定的抗親和素抗體所捕獲形成一條紅色對照帶，反應完成后，分析儀對對照帶和檢測帶進行分析，計算出樣本中的抗繆勒氏管激素濃度。

一種抑制素B測定試劑盒的制備方法，所述的制備方法包括如下步驟：

一、包被硝酸纖維素膜

1）配制包被液：將抗INHB抗體以及親合素抗體配制成0.5-2mg/mL的包被濃度；

2）包被：將硝酸纖維膜裁成膜片，將上一步驟中配置好的包被液包被在硝酸纖維膜片上；

3）干燥：將包被好的膜片置于37℃恒溫干燥18-20個小時；

二、包被金標墊

1）標記抗體：制備膠體金標記鼠單抗INHB抗體和親合素偶合物，并配制成0.5-2mg/mL的包被濃度；

2）包被：將玻璃纖維素膜切割為膜片，用封閉液封閉后干燥，將上一步驟中配制好的溶液包被在玻璃纖維素膜片上；

3）干燥：將包被好的玻璃纖維素膜片置于37℃恒溫干燥18-22個小時，得到包被好的金標墊；

三、貼膜

1、將包被的硝酸纖維素膜、包被金標墊、樣品墊和液體吸水墊按次序依次組合后黏貼在PVC板上，制成檢測條；

四、切割

將（三）中檢測條切成一定寬度的條帶；

五、組裝

1）將切割成單人份的小條按照次序裝于金標外殼，壓緊金標上蓋，得到試劑盒。

進一步的，所述的試劑盒用于檢測檢測人血清、血漿、全血中的INHB濃度。

本發明的有益效果在于，本發明檢測卡能夠快速定量檢測人血清、血漿、全血中的INHB濃度，首先操作簡單，使用方便，單人份獨立包被，克服了小樣本量不能即時檢測的弊端，20分鐘即可報告濃度結果，大大縮短了檢測時間。

具體實施例

一種抑制素B測定試劑盒的制備方法:

一、包被硝酸纖維素膜

1）配制包被液：將抗INHB抗體以及親合素抗體配制成相應的包被濃度；

2）包被：將硝酸纖維膜栽成300mmX25mm的膜片，通過包被機，將1）中配置好的包被液包被在膜片上；

3）干燥：將包被好的膜片條置于37℃恒溫干燥18-20個小時。

二、包被金標墊

1）標記抗體：制備膠體金標記鼠單抗INHB抗體和親合素偶合物，并配制成相應的包被濃度；

2）包被：將玻璃纖維素膜切割為300X13mm的膜片，用封閉液封閉后干燥，將1）中配制好的溶液包被在墊上；

3）干燥：將包被好的金標墊條置于37℃恒溫干燥18-22個小時。

三、貼膜