[發明專利]一種基于銀超晶體的黃曲霉毒素B1快速免標記檢測方法

有效

• 申請號: 201710568030.6
• 申請日: 2017-07-13
• 公開（公告）號: CN107462564B
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發明（設計）人: 陳全勝;楊明秀;歐陽琴;孫浩;劉妍
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種基于銀超晶體的黃曲霉毒素B1快速免標記檢測方法，屬于食品監測等技術領域。首先通過在超大孔介孔二氧化硅模板上負載銀，構建介孔結構的銀超晶體表面增強拉曼基底，建模樣本表面增強拉曼光譜信號的采集，采用密度泛函理論計算黃曲霉毒素B1的理論拉曼光譜，對比計算的理論拉曼光譜和采集的表面增強拉曼光譜對黃曲霉毒素B1進行特征峰歸屬，表面增強拉曼光譜的預處理，根據特征峰的歸屬挑選具有代表性的特征變量，采用多元校正的方法建立黃曲霉毒素B1濃度和對應表面增強拉曼光譜變量之間的定量關系模型，模型精確度和穩定性的評估。本方法操作簡單，檢測速度快、精度較高、穩定性好等可以對黃曲霉毒素B1實現大批量原位檢測。

技術領域

本發明介紹了一種基于銀超晶體的黃曲霉毒素B1快速免標記檢測方法，制備了銀超晶體以超大介孔二氧化硅作為模板的表面拉曼增強基底來增強真菌毒素的拉曼信號，采用密度泛函理論計算了真菌毒素的理論拉曼光譜，采用數據建模的方法建立真菌毒素濃度和對應拉曼光譜之間的定量關系模型。本發明方法操作簡單，檢測速度快、精度較高、穩定性好等可以實現對真菌毒素的大批量原位檢測。

背景技術

真菌毒素是玉米、花生等谷物食品中常見的微生物毒素，是真菌在食品或飼料里生長所產生的有毒次級代謝產物，具有潛在的致肝癌、胃癌、腎癌、腸癌的可能性。目前常規的用于真菌毒素的檢測方法，主要有生物鑒定法，但此方法只能用于定性檢測，專一性不強，靈敏度低；化學分析法(薄層層析法)，精密度差，難以在實際中應用；儀器法(氣相色譜法、液相色譜法、氣質聯用法、液質聯用法)，但前處理復雜，儀器昂貴；免疫分析法(酶聯免疫吸附法，免疫熒光技術，放射免疫測定法等)，但此方法存在一定的假陽性。所以急需建立一種靈敏度高、穩定性強、操作簡單的真菌毒素快速、定量檢測方法。

拉曼散射光譜可以獲取分子結構的指紋信息，具有強大的分子識別能力，是分子信息快速獲取的理想手段。而表面增強拉曼光譜技術作為拉曼光譜技術的延伸和發展在微量物質的定量分析檢測上有越來越多的應用。根據被測物特定波長下的拉曼峰強度，可以建立被測物濃度和拉曼峰強度之間的線性關系。但由于背景信號、熒光信號、噪音等的干擾，采用單一的峰強度有時并不能與被測物濃度建立很好的相關關系，因此，本專利在制備的銀超晶體表面拉曼增強基底的基礎上采集樣本的拉曼光譜，采用密度泛函理論計算真菌毒素的理論拉曼光譜，進行拉曼譜峰歸屬，提出特征變量，光譜預處理方法對采集的光譜進行預處理，最后利用數據處理算法建立拉曼光譜預測值和被測物真實值之間的相關關系模型，并對模型的精確度和穩定性進行評估。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于銀超晶體的黃曲霉毒素B1快速免標記檢測方法，該方法結合表面增強拉曼光譜技術和數據建模的方法，實現了真菌毒素的快速免標記檢測，對真菌毒素的檢測穩定性好，靈敏度高。

為了實現上述目的，本發明的技術方案包括：超大孔介孔二氧化硅模板上負載銀超晶體的表面增強拉曼基底的構建，建模樣本表面增強拉曼光譜信號的采集，采用密度泛函理論計算真菌毒素的理論拉曼光譜，對比計算的理論拉曼光譜和采集的表面增強拉曼光譜對真菌毒素進行特征峰歸屬及特征變量的提取，表面增強拉曼光譜的預處理，采用數據建模的方法建立真菌毒素濃度和對應拉曼光譜之間的定量關系模型，模型精確度和穩定性的評估。該方法適用于食品安全、環境監測等技術領域。

上述的一種基于銀超晶體的黃曲霉毒素B1快速免標記檢測方法，包括如下具體步驟：1)超大孔介孔二氧化硅(EP-FDU-12)的制備：1.0g三嵌段高分子共聚物EO106PO70EO106(聚丙二醇與環氧乙烷的加聚物，pluronic F127)與1.2g 1,3,5-三甲基苯(TMB)，2.5g氯化鉀溶解在60mL,2M的鹽酸中，15±0.1℃的條件下攪拌2h，4.16g四乙基正硅酸鹽(TEOS)加入上述溶液，15±0.1℃的條件下強烈攪拌24h，反應結束后將溶液轉移到高壓反應釜中，100℃下反應24h，室溫下過濾，用熱的清水洗兩次，室溫下干燥。表面活性劑在550℃下煅燒6h除去，得到的白色粉末即為EP-FDU-12。