[發明專利]一種檢測褐飛虱蛋白質總含量的方法

在審

• 申請號: 201710566946.8
• 申請日: 2017-07-12
• 公開（公告）號: CN107389580A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 黃立飛;姜建軍;陳紅松;楊朗;馬琳;梁蓮華;韋柳芝;王偉力
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N1/28
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙)11548
• 代理人: 李靜

1.一種檢測褐飛虱蛋白質總含量的方法，其特征在于：包括以下步驟：

褐飛虱異常溫度的處理；

蛋白質的提取；

蛋白質的檢測。

2.根據權利要求1所述的一種檢測褐飛虱蛋白質總含量的方法，其特征在于：褐飛虱異常溫度的處理的具體步驟為：實驗設3種不同的異常溫度處理，在人工氣候箱設置處理，分別為：連續性高溫：早晚25℃，11:00-13:00高溫34℃，13:01-16:00高溫38℃，連續5天，間斷性高溫：第一天，早晚25℃，11:00-13:00高溫34℃，13:01-16:00高溫38℃，第二天，早晚25℃，9:00-17:00常溫28℃，第三天，早晚25℃，11:00-13:00高溫34℃，13:01-16:00高溫38℃，第四天，早晚25℃，9:00-17:00常溫28℃，第五天，早晚25℃，11:00-13:00高溫34℃，13:01-16:00高溫38℃，夏季異常低溫：9:00-17:0022℃，18:00-8:0018℃連續4天，第五天，早晚25℃，9:00-17:00常溫28℃，對照處理：早晚25℃，白天28℃，將網室種植的3種不同品種的健壯稻株轉移到花盆中，經過48小時的恢復時間后，用吸蟲器取不同齡期的褐飛虱若蟲轉移到健壯稻株上，每株上放20頭齡期一致的褐飛虱為一次重復，共5個重復，放到人工氣候箱中進行異常溫度處理，處理完成后轉移到自然溫度條件下進行生長，每天定時觀察、記錄褐飛虱蛻皮數，死亡數、羽化時間、雌性比以及翅型分化，直至褐飛虱羽化為成蟲為止。

3.根據權利要求2所述的一種檢測褐飛虱蛋白質總含量的方法，其特征在于：3種不同品種的健壯稻株分別為ASD7-抗蟲品種、TN1-感蟲品種、桂育9-常規稻品種。

4.根據權利要求1所述的一種檢測褐飛虱蛋白質總含量的方法，其特征在于：蛋白質的提取的具體步驟為：處理后的褐飛虱幼蟲放進烘箱高溫烘干處理后，在電子天平上及時稱重，然后分別放入10mL的Eppendorf管中，并加入5mL磷酸緩沖液，在冰浴中充分研磨后，4500r/min下離心10min，取出上清液移至2mL的Eppendorf管中，12000r/min下高速離心l2min，獲得無懸浮脂肪顆粒的上清液，用于蟲體蛋白質含量的測定。

5.根據權利要求1所述的一種檢測褐飛虱蛋白質總含量的方法，其特征在于：蛋白質的檢測的具體步驟為：用牛血清蛋白配置標準蛋白質溶液，分別取0、20、40、60、80、100和l20uL，加入7個具塞試管中，然后依次加入1000、980、960、940、920、900和880uL的蒸餾水，配制出7個濃度梯度(0、20、40、60、80、100和120ug/mL)的標準蛋白質溶液，分別加入提前配制的考馬斯亮藍溶液5mL，用紫外分光光度計在595nm處測定吸光度值，根據吸光值繪制蛋白質標準曲線，然后取蛋白質提取液50uL，加入950uL的蒸餾水，混勻后加入考馬斯亮藍溶液5mL。用紫外分光光度計在595nm處測定吸光度值，根據標準曲線計算樣品的蛋白質含量。