[發明專利]一種從重度污染的細胞培養液中挽救細胞的方法

在審

• 申請號: 201710566161.0
• 申請日: 2017-07-12
• 公開（公告）號: CN107312753A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 朱杰;李招云;胡煒;王攀;徐友文;陳文舉;楊英梅;吳波;呂佳銘
• 申請（專利權）人: 朱杰
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種從重度污染的細胞培養液中挽救細胞的方法，其特征在于，包括如下步驟：

a、取1瓶含有被細菌重度污染的細胞培養液，丟棄除貼壁細胞以外的上層被污染的細胞培養液，用無菌PBS緩沖液沖洗3次并且吹打，然后丟掉無菌PBS緩沖液，然后加入500μg/ml的左氧氟沙星培養液250μl使得左氧氟沙星培養液覆蓋培養瓶底部，然后將培養瓶置于CO₂的培養箱培養；

b、取完成步驟a的培養體系,吸棄除貼壁細胞以外的液體，用無菌PBS緩沖液沖洗3次并且吹打，然后丟掉無菌PBS緩沖液，然后加入200μg/ml的左氧氟沙星培養液3ml,然后在CO₂的培養箱培養；

c、取完成步驟b的培養體系，吸棄除貼壁細胞以外的液體，用無菌PBS緩沖液沖洗3次并且吹打，然后丟掉無菌PBS緩沖液，然后加入100μg/ml的左氧氟沙星培養液3ml，然后在CO₂的培養箱培養；

d、取完成步驟c的培養體系，吸光培養瓶中的培養液，用無菌PBS緩沖液沖洗2次，加入體積為1ml到2ml的0.25％胰蛋白酶液，靜置2mim-10min，吸去胰蛋白酶液，加入常規培養液2ml，用吸管吸取瓶內培養液，反復吹打瓶壁細胞，形成細胞懸液，把細胞懸液放入離心管中，然后在離心機內進行離心，離心后棄上清，得到細胞沉淀，然后將細胞沉淀和3ml常規培養液加入到培養瓶中，然后置于CO₂的培養箱進行正常培養；

所述常規培養液為含體積比為8％的胎牛血清的RPMI-1640培養基；所述細胞培養液為一株貼壁生長的鼻咽癌HK-1細胞培養液。

2.根據權利要求1所述一種從重度污染的細胞培養液中挽救細胞的方法，其特征在于，所述無菌PBS緩沖液的PH為7.4，其濃度為0.01mol/L。

3.根據權利要求1所述一種從重度污染的細胞培養液中挽救細胞的方法，其特征在于，所述CO₂的培養箱內溫度為37℃,CO₂的濃度為5.0％。

4.根據權利要求1所述一種從重度污染的細胞培養液中挽救細胞的方法，其特征在于，所述重度污染的細胞培養液的活力為30％到39％。

5.根據權利要求1所述一種從重度污染的細胞培養液中挽救細胞的方法，其特征在于，所述離心機的轉速為1000rad/min。