[發(fā)明專利]使靶細(xì)胞可逆染色的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710565030.0
• 申請日: 2012-07-17
• 公開（公告）號: CN107843730B
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 托馬斯·施密特;克里斯蒂安·施滕貝爾;迪爾克·H·布施;洛塔爾·格爾梅羅特
• 申請（專利權(quán)）人: IBA生命科學(xué)股份有限公司
• 主分類號: G01N33/557
• 分類號: G01N33/557;G01N33/569;G01N1/30
• 代理公司: 北京瑞恒信達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11382
• 代理人: 曹津燕;丁磊

1.一種使用可檢測標(biāo)記使靶細(xì)胞可逆染色的方法，所述靶細(xì)胞包含在其表面上的受體分子，所述方法包括：

使包含所述靶細(xì)胞的細(xì)胞混合物與下述接觸：

(i)受體結(jié)合試劑，所述受體結(jié)合試劑包含至少一個結(jié)合位點B，其中所述結(jié)合位點B特異性結(jié)合至所述受體分子，其中所述受體結(jié)合試劑經(jīng)由所述結(jié)合位點B和所述受體分子之間的結(jié)合的解離速率常數(shù)(k_off)的值為1×10^-3sec^-1或更大，所述受體結(jié)合試劑進(jìn)一步包含至少一個結(jié)合配偶體C，其中所述結(jié)合配偶體C能夠可逆結(jié)合至多聚化試劑的結(jié)合位點Z；

(ii)多聚化試劑，所述多聚化試劑包含用于所述受體結(jié)合試劑的結(jié)合配偶體C的可逆結(jié)合的至少兩個結(jié)合位點Z，

其中所述受體結(jié)合試劑和所述多聚化試劑形成結(jié)合至所述靶細(xì)胞的多價結(jié)合復(fù)合物，每個多價結(jié)合復(fù)合物包含結(jié)合至一個所述多聚化試劑的至少兩個所述受體結(jié)合試劑，所述多價結(jié)合復(fù)合物相對于所述受體結(jié)合試劑提供增加的親合力；和

(iii)所述可檢測標(biāo)記，所述可檢測標(biāo)記結(jié)合至或能夠結(jié)合至所述多價結(jié)合復(fù)合物，

其中所述靶細(xì)胞通過所述多價結(jié)合復(fù)合物與所述靶細(xì)胞的結(jié)合染色，并且其中經(jīng)所述受體結(jié)合試劑的所述結(jié)合配偶體C與所述多聚化試劑的所述結(jié)合位點Z之間的結(jié)合的破裂，所述靶細(xì)胞的染色是可逆的。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述結(jié)合位點Z與所述配偶體C的可逆結(jié)合的解離常數(shù)(K_d)在10^-2M到10^-13M的范圍內(nèi)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述受體結(jié)合試劑與所述受體分子之間的結(jié)合的解離速率常數(shù)(k_off)的值為1.5×10^-3sec^-1或更大。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述受體結(jié)合試劑與所述受體分子之間的結(jié)合的解離速率常數(shù)(k_off)的值為2×10^-3sec^-1或更大。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述受體結(jié)合試劑與所述受體分子之間的結(jié)合的解離速率常數(shù)(k_off)的值為3×10^-3sec^-1或更大。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述受體結(jié)合試劑與所述受體分子之間的結(jié)合的解離速率常數(shù)(k_off)的值為4×10^-3sec^-1或更大。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述受體結(jié)合試劑與所述受體分子之間的結(jié)合的解離速率常數(shù)(k_off)的值為5×10^-3sec^-1或更大。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述受體結(jié)合試劑與所述受體分子之間的結(jié)合的解離速率常數(shù)(k_off)的值為1×10^-2sec^-1或更大。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述受體結(jié)合試劑與所述受體分子之間的結(jié)合的解離常數(shù)(K_d)在10^-2M到10^-10M的范圍內(nèi)。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述受體結(jié)合試劑與所述受體分子之間的結(jié)合的解離常數(shù)(K_d)在10^-7M至10^-10M的范圍內(nèi)。

11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其進(jìn)一步包括從存在于所述細(xì)胞混合物中的非靶細(xì)胞分離所述染色的細(xì)胞。