[發明專利]一種多氧霉素I組分高產菌株的篩選方法

在審

• 申請號: 201710564816.0
• 申請日: 2017-07-12
• 公開（公告）號: CN107287184A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 李盛英;杜磊;馬圓圓;徐曉慶;王玉亭
• 申請（專利權）人: 乳山韓威生物科技有限公司;青島中科青石生物科技有限公司
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N1/20;C12N1/02;C12R1/465
• 代理公司: 北京怡豐知識產權代理有限公司11293
• 代理人: 于振強

1.一種多氧霉素I組分高產菌株的篩選方法，其特征是包括以下步驟：

步驟1、將多氧霉素出發菌株圈卷產色鏈霉菌野生型P0接種于斜面培養基恒溫培養，所述斜面培養基包括以下成份，單位為g/L：可溶性淀粉：15～25；KNO₃：0.8～1.2；K₂HPO₄：0.3～0.8；MgSO₄·7H₂O：0.3～0.8；NaCl：0.3～0.8；FeSO₄·7H₂O：0.008～0.012；瓊脂：15～25；

步驟2、挑選步驟1培養的孢子，并加入生理鹽水，制成孢子懸液；

步驟3、按步驟1所述培養基配制不同濃度的5-氟尿嘧啶的孢子培養基，5-氟尿嘧啶濃度，分別為0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.3、0.5、1，單位為g/L；

步驟4、將步驟1所述的野生型菌株P0作為出發菌株，分別涂布于步驟3所述的不同濃度的5-氟尿嘧啶孢子培養基，恒溫培養；

步驟5、根據步驟4所述的孢子生長情況，選擇3種不同濃度的5-氟尿嘧啶孢子培養基，其濃度分別為0.1、0.3、1，單位為g/L；

步驟6、將步驟2所述的孢子懸液稀釋，取3～5mL稀釋后的孢子懸液置于無菌平板中，放置于紫外誘變箱中進行照射；

步驟7、將步驟6所述的無菌平板取出，將其上的孢子懸液稀釋，并分別涂布于步驟5所述的3種不同濃度的5-氟尿嘧啶孢子培養基，恒溫培養；

步驟8、挑選步驟7培養的突變后的單菌落，接種于步驟1所述的斜面培養基，恒溫培養；

步驟9、將步驟8培養的菌落接種到種子培養基，恒溫培養，所述種子培養基包括以下成份，單位為g/L：酵母提取物：8～12；胰蛋白胨：12～18；KNO₃：0.8～1.2；K₂HPO₄：0.3～0.8；MgSO₄·7H₂O：0.3～0.8；NaCl：0.3～0.8；FeSO₄·7H₂O：0.008～0.012；

步驟10、將步驟9培養的菌落按菌落與發酵培養基體積百分比8～12％的接種量接種到發酵培養基進行搖瓶發酵，同時以步驟4所述的出發菌株做對照，所述發酵培養基包括以下成份，單位為g/L：淀粉：40～60；豆粕粉：20～28；酵母提取物：3～8；甘露醇：3～8；NaCl：3～8；NH₄SO₄：0.3～0.8；CaCO₃：1～5；

步驟11、對步驟10的發酵產物中多氧霉素組分變化進行檢測，篩選與出發菌株P0次級代謝組分有差異的菌株；

步驟12、對步驟11篩選的菌株進行檢測，篩選出多氧霉素I組分高產菌株。

2.根據權利要求1所述的多氧霉素I組分高產菌株的篩選方法，其特征在于，所述步驟1中斜面培養基包括以下成份，單位為g/L：可溶性淀粉：20；KNO₃：1；K₂HPO₄：0.5；MgSO₄·7H₂O：0.5；NaCl：0.5；FeSO₄·7H₂O：0.01；瓊脂：20；所述斜面培養基的pH值為7.0。

3.根據權利要求1所述的多氧霉素I組分高產菌株的篩選方法，其特征在于，所述步驟9中，種子培養基包括以下成份，單位g/L：酵母提取物：10；胰蛋白胨：16；KNO₃：1；K₂HPO₄：0.5；MgSO₄·7H₂O：0.5；NaCl：0.5；FeSO₄·7H₂O：0.01；所述種子培養基的pH值為7.0。

4.根據權利要求1所述的多氧霉素I組分高產菌株的篩選方法，其特征在于，所述步驟10中，發酵培養基包括以下成份，單位為g/L：淀粉：50；豆粕粉：25；酵母提取物：5；甘露醇：5；NaCl：5；NH₄SO₄：0.5；CaCO₃：2；所述發酵培養基的pH值為7.1。