[發(fā)明專利]一種特異性敲減人BRCC3基因慢病毒的構(gòu)建及在肺癌中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710562291.7
• 申請(qǐng)日: 2017-07-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107190007B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-02-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋鑫;付橋粉;孟旭東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 信雅生物科技（蘇州）有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N7/01;C12N15/867;C12N15/66
• 代理公司: 上海宣宜專利代理事務(wù)所(普通合伙) 31288
• 代理人: 劉君

1.一種特異性敲減人BRCC3基因的shRNA序列，其包括下述1)和2)中的至少一個(gè)雙鏈核苷酸序列：

1)正義鏈為RNAi-1-F的核苷酸序列，反義鏈為RNAi-1-R的核苷酸序列；

2)正義鏈為RNAi-2-F的核苷酸序列，反義鏈為RNAi-2-R的核苷酸序列；

RNAi-1-F：

CcgggcCGTCAGAATTGTTCACATTCTCGAGAATGTGAACAATTCTGACGGCTTTTTg

RNAi-1-R：

aattcaaaaagcCGTCAGAATTGTTCACATTCTCGAGAATGTGAACAATTCTGACGGC

RNAi-2-F：

CcgggaGCACAGAGAAGGAGGAAGTCTCGAGACTTCCTCCTTCTCTGTGCTCTTTTT

RNAi-2-RaattcaaaaagaGCACAGAGAAGGAGGAAGTCTCGAGACTTCCTCCTTCTCTGTGCTC。

2.如權(quán)利要求1中任一所述的能特異性敲減人BRCC3基因的shRNA序列，其特征在于：所述的能夠特異性敲減人BRCC3基因的shRNA序列可應(yīng)用于制備治療腫瘤藥物。

3.一種特異性敲減人BRCC3基因的慢病毒的構(gòu)建方法，其包括如下步驟：

Step1,通過(guò)PCR合成權(quán)利要求1中能特異性敲減人BRCC3基因的shRNA序列；

Step2,構(gòu)建能特異性干擾BRCC3基因的重組質(zhì)粒；

Step3,包裝能特異性干擾BRCC3基因的慢病毒；

Step4,篩選驗(yàn)證Step3中的能夠特異性干擾BRCC3基因的慢病毒；

Step5,觀察Step3中能夠特異性干擾BRCC3基因的慢病毒對(duì)肺癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。

4.如權(quán)利要求3所述的特異性敲減人BRCC3基因的慢病毒的構(gòu)建方法，其特征在于：所述的步驟Step1中，選用限制性內(nèi)切酶Age I和EcoR I，分別于靶序列的5’端和3’端加上AgeI、EcoR I限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)。

5.如權(quán)利要求3所述的特異性敲減人BRCC3基因的慢病毒的構(gòu)建方法，其特征在于：驗(yàn)證Step3中慢病毒的方法，可以直接利用Western blot驗(yàn)證BRCC3蛋白的表達(dá)，和/或采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR。