[發(fā)明專利]一種SNP位點檢測溶液體系及試劑盒

在審

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• 申請日: 2017-07-11
• 公開（公告）號: CN107287318A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發(fā)明（設計）人: 李欣;吳少鴻;劉奇志;王祖雄;付劍鋒
• 申請（專利權）人: 廈門美因生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京金蓄專利代理有限公司11544
• 代理人: 榮文英

技術領域

本發(fā)明涉及基因工程技術領域，特別地，涉及一種適用于SNP位點檢測的溶液體系。

背景技術

單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)是指由于單個核苷酸的變異而引起基因組水平上的DNA序列多態(tài)性，形式包括單堿基的缺失、插入、轉換及顛換等。一般而言，上述形式中最少一種等位基因在群體中的頻率不小于1％，但在某種特殊情況下(如cDNA中)也可以小于1％。1個SNP在基因組某個位點上有單個核苷酸的變化，主要由兩種形式出現(xiàn)：一種是單個基因的轉換引起的，即以一種嘧啶置換另一種嘧啶或一種嘌呤置換另一種嘌呤；另外一種形式就是顛換、即嘌呤與嘧啶互換。從原理上分析，突變處的堿基可以是C、G、A、T，而實際上SNP多發(fā)生在T和C之間。人類遺傳基因的多態(tài)性在遺傳信息上的本質表現(xiàn)，90％以上是由SNP所引起的。因為其多肽信息量大，目前已成為繼限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)標志和微衛(wèi)星即短串聯(lián)重復(STR)標志后的第三代遺傳標志。

從基礎醫(yī)學到臨床醫(yī)學的各個領域，SNP都存在巨大的應用價值。SNP的研究為基因診斷，尤其是疾病的早期診斷提供更多依據有重要意義。SNP由于其分布廣、密度高而被期望在諸如癌癥、糖尿病、高血壓、憂郁癥和哮喘等復雜疾病的研究中起重要作用，這些復雜疾病是多個遺傳變異位點與環(huán)境因子共同作用的結果，由于發(fā)病原因復雜，涉及的基因數(shù)量多，已成為國際上疾病基因組學研究的重點。目前已有實驗將SNP應用于腫瘤預后及易感性的判斷，例如肺癌致癌物的易感性存在個體差異，即肺癌的基因易感性，研究較多的是代謝酶基因多態(tài)性。

SNP檢測方法的研究是研究疾病發(fā)生相關SNP的前提和基礎。SNP的檢測方法與核酸序列測定不同，它需要檢測出基因組DNA中某一特定核苷酸位置上轉換、顛換、插入或缺失堿基的變化，對檢測的靈敏度、通量以及準確性等都有極高的要求，檢測方法比一般的DNA測序更為復雜和煩瑣。截至目前已報導的SNP檢測方法約有70種之多，而如何做到花費更少的成本而達到檢測目的成為了各基因檢測公司研發(fā)的方向。目前，幾乎全部的SNP檢測試劑盒體中，僅PCR反應液就達到10μl體系，雖然單個試劑盒的溶液量較小，但基于基因檢測領域龐大的基數(shù)而言，依然存在因為檢測溶液的體系總量略大，而造成原料浪費的問題。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了一種SNP位點檢測溶液體系，以解決現(xiàn)有技術中SNP位點檢測溶液量消耗較大的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出了一種SNP位點檢測溶液體系，包括：與待檢測SNP位點相適配的引物、DNA模板、探針，以及PCR擴增液；且所述SNP位點檢測溶液體系的總體積為8μl。

所述引物包括適用于不同待檢測SNP位點的正引物和反引物。

所述PCR擴增液包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、PCR反應緩沖液和去離子水。

具體的，所述的SNP位點檢測溶液體系，包括如下含量組分：

具體的，所述的SNP位點檢測溶液體系，包括如下含量組分：

所述正引物和所述反引物的濃度比為1：5-5：1。

本發(fā)明還公開了所述的SNP位點檢測溶液體系用于制備SNP位點檢測試劑盒的用途。

本發(fā)明還公開了一種SNP位點檢測試劑盒，包括所述的SNP位點檢測溶液體系，以及盒體。

本發(fā)明還公開了一種檢測SNP位點的方法，即使用所述的試劑盒進行檢測。

有益效果：

本發(fā)明所述SNP位點檢測溶液體系，在現(xiàn)有檢測體系的基礎上，通過調整各成分的比例含量，將溶液體系由原來的10μl體系縮減到了8μl體系，減小溶液體系總量20％，即減少了20％的原料消耗，達到節(jié)省生產成本的目的，同時，優(yōu)化后的檢測溶液體系能夠準確、快速的完成SNP位點的檢測之用。

附圖說明

圖1為本發(fā)明MIX1體系的SNP位點檢測結果示意圖；

圖2為是本發(fā)明MIX2體系的SNP位點檢測結果示意圖；

圖3-5為本發(fā)明MIX1體系的另一種SNP位點檢測結果示意圖；

圖6為現(xiàn)有MIX3體系的SNP位點檢測結果示意圖。

具體實施方式

為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點能夠更加明顯易懂，下面結合附圖和具體實施方式對本發(fā)明作進一步詳細的說明。

為了證實該體系的優(yōu)點，本實驗選取3個基因上的位點，利用LC480儀器進行檢測。