[發明專利]一種利用樺褐孔菌固體發酵農林廢棄物生產酸性纖維素酶的工藝

有效

• 申請號: 201710558365.X
• 申請日: 2017-07-10
• 公開（公告）號: CN107189996B
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發明（設計）人: 徐向群;林蒙蒙
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12R1/645
• 代理公司: 杭州知見專利代理有限公司 33295
• 代理人: 趙越劍

1.一種利用樺褐孔菌固體發酵農林廢棄物生產酸性纖維素酶的工藝，其特征在于，包括如下步驟：

（1）菌種活化：以樺褐孔菌為菌種，接種至斜面菌種培養基上培養，獲得活化菌種；

（2）液體菌種培養：將活化菌種轉入種子培養基中，28℃下搖床轉速150轉/分鐘的條件下搖床培養3天得液體菌種；

（3）固體發酵：將液體菌種接種至固體發酵培養基中，控制初始pH至3.5-9.0，24-32℃下發酵培養10-15天；所述固體發酵培養基由農林廢棄物與營養鹽溶液按 1g:1-4mL的配比， pH 6.0，充分攪拌，121℃濕熱滅菌20min而得；

（4）酸性纖維素酶分離：發酵結束后，按照每1g發酵產物干重加10mL醋酸-醋酸鈉緩沖液的配比加入濃度50mM的 pH5.0醋酸-醋酸鈉緩沖液，攪拌混合均勻，在28℃下振蕩浸提1h，4000r/min離心5min，透析，冷凍干燥；

所述農林廢棄物為麩皮、玉米芯、櫸木、柚子皮、豆粕、甘蔗渣、木薯皮、花生殼中的一種或幾種；

所述的營養鹽溶液配方為：(NH₄)₂SO₄ 1.7g，KH₂PO₄ 2g，CaCl₂ 0.3g，蛋白胨1 g，Tween-80 2mL，MgSO₄ 0.3 g， 蒸餾水1000mL，微量元素混合液1mL；所述微量元素混合液每毫升含：FeSO₄ 0.005mg，MnSO₄ 0.002mg， ZnSO₄·7H₂O 0.0016mg，CoCl₂ 0.0014mg；

所述酸性纖維素酶最適反應溫度范圍為40℃-60℃，最適反應pH范圍為3.0-4.0。

2.根據權利要求1所述的一種利用樺褐孔菌固體發酵農林廢棄物生產酸性纖維素酶的工藝，其特征在于，步驟（3）中液體菌種的接種量為每1g農林廢棄物加0.1-0.8mL。

3.根據權利要求1所述的一種利用樺褐孔菌固體發酵農林廢棄物生產酸性纖維素酶的工藝，其特征在于，所述種子培養基組成為：KH₂PO₄ 0.3g，MgSO₄ 0.2 g，酵母浸膏 3 g，蛋白胨0.5 g ，葡萄糖10 g，蒸餾水1000mL，pH自然，121℃濕熱滅菌20min。

4.根據權利要求1所述的一種利用樺褐孔菌固體發酵農林廢棄物生產酸性纖維素酶的工藝，其特征在于，所述斜面菌種培養基的配方為：麥芽浸膏40 g/100mL，蛋白胨4 g/100mL，瓊脂10 g/100mL，pH值為5.4-5.6。

5.根據權利要求4所述的一種利用樺褐孔菌固體發酵農林廢棄物生產酸性纖維素酶的工藝，其特征在于，斜面菌種培養基上培養的參數為：溫度27-28℃，培養200-250小時。

6.一種利用權利要求1的工藝生產的酸性纖維素酶的應用，其特征在于，所述酸性纖維素酶用于稻稈和麥稈的降解糖化。