[發(fā)明專利]一種生產(chǎn)鯊烯的基因工程菌及其方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710558151.2
• 申請日: 2017-07-10
• 公開（公告）號: CN109234216B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝麗萍;胡又佳;劉海元;龔桂花;張偉;韓姝;潘潔;宋智慧
• 申請（專利權(quán)）人: 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P33/00;C12P5/02;C12R1/19
• 代理公司: 上海弼興律師事務(wù)所 31283
• 代理人: 薛琦;朱水平

1.一種生產(chǎn)鯊烯的基因工程菌，其特征在于，其為大腸桿菌（Escherichia coli）中表達(dá)鯊烯合酶基因、5-磷酸脫氧木酮糖合酶基因、異戊烯基二磷酸異構(gòu)酶基因以及法尼基焦磷酸合酶基因的基因工程菌；所述鯊烯合酶基因來源于解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）；

所述解脂耶氏酵母為解脂耶氏酵母ATCC 20362，所述鯊烯合酶基因的核苷酸序列如Gene ID: 2906604所示；

所述5-磷酸脫氧木酮糖合酶基因、所述異戊烯基二磷酸異構(gòu)酶基因以及所述法尼基焦磷酸合酶基因來源于大腸桿菌。

2.如權(quán)利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，其攜帶含有所述鯊烯合酶的表達(dá)載體1以及含有5-磷酸脫氧木酮糖合酶基因、異戊烯基二磷酸異構(gòu)酶基因和法尼基焦磷酸合酶基因的表達(dá)載體2。

3.如權(quán)利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述表達(dá)載體1含有至少兩個鯊烯合酶基因。

4.如權(quán)利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，每個鯊烯合酶基因具有一個啟動子。

5.如權(quán)利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述啟動子為T7啟動子。

6.如權(quán)利要求2-5任一項所述的基因工程菌，其特征在于，所述5-磷酸脫氧木酮糖合酶基因帶有1個啟動子；而異戊烯基二磷酸異構(gòu)酶基因和法尼基焦磷酸合酶基因串聯(lián)表達(dá)，帶有共同的啟動子。

7.如權(quán)利要求6所述的基因工程菌，其特征在于，所述啟動子為T7啟動子。

8.如權(quán)利要求2-5任一項所述的基因工程菌，其特征在于，所述表達(dá)載體1的骨架是質(zhì)粒pACYDuet-1；和/或，所述表達(dá)載體2的骨架是質(zhì)粒pRSFDuet-1。

9.如權(quán)利要求8所述的基因工程菌，其特征在于，所述大腸桿菌為大腸桿菌BL21（DE3）菌株。

10.如權(quán)利要求1-5任一項所述的基因工程菌，其特征在于，所述5-磷酸脫氧木酮糖合酶基因、所述異戊烯基二磷酸異構(gòu)酶基因以及所述法尼基焦磷酸合酶基因來源于大腸桿菌（Escherichia coli） K12 MG1655。

11.一種如權(quán)利要求1-10任一項所述基因工程菌的制備方法，其特征在于，所述方法包括下列步驟：

1）構(gòu)建含有鯊烯合酶的表達(dá)載體1以及含有5-磷酸脫氧木酮糖合酶基因、異戊烯基二磷酸異構(gòu)酶基因和法尼基焦磷酸合酶基因的表達(dá)載體2；

2）以大腸桿菌（Escherichia coli）為宿主菌株，用步驟1）得到的表達(dá)載體1和表達(dá)載體2同時進(jìn)行轉(zhuǎn)化，獲得重組表達(dá)鯊烯的大腸桿菌基因工程菌。

12.一種鯊烯的制備方法，其特征在于，包括將權(quán)利要求1-10任一項所述的基因工程菌發(fā)酵，從發(fā)酵液中獲得鯊烯。