[發明專利]一種基于多巴胺聚合反應調控的上轉換熒光共振能量傳遞檢測組合物及檢測方法

有效

• 申請號: 201710554255.6
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107402198B
• 公開（公告）日: 2019-10-29
• 發明（設計）人: 陳學元;劉*;鄭偉;涂大濤;盧連宇;周山勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院福建物質結構研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 劉元霞

1.一種上轉換熒光共振能量傳遞檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括如下步驟：

1)將上轉換熒光納米材料超聲分散于去離子水，得到熒光供體溶液；

2)將多巴胺單體超聲分散于去離子水，制備得到熒光受體的前體溶液；

3)將步驟1)的熒光供體溶液、步驟2)的熒光受體的前體溶液和緩沖液混合，孵育，測定混合液的上轉換熒光強度，并計算熒光受體的前體溶液的熒光猝滅效率，選取熒光猝滅效率最大時混合液所對應的熒光供體溶液和熒光受體的前體溶液的濃度值；

4)繪制待測目標物的濃度依賴型標準曲線；

5)檢測待測目標物的濃度；

任選地，步驟1)或2)所得的溶液中進一步含有其他組分；

所述待測目標物選自過氧化氫或可生成過氧化氫的生化體系；

步驟1)中，所述上轉換熒光納米材料選自表面無有機配體且水溶解性好的上轉換熒光納米材料，其是將上轉換熒光納米材料采用酸洗處理的方法制備得到的，所述酸洗后的上轉換納米材料表面帶正電荷的稀土離子Ln³⁺；

步驟3)中，所述熒光供體溶液、熒光受體的前體溶液和緩沖液混合后，熒光受體的前體生成熒光受體并包覆在上轉換熒光納米材料表面，形成包覆型上轉換納米材料的復合物；

所述熒光受體選自聚合多巴胺；所述熒光受體的前體選自多巴胺單體。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟1)中，所述熒光供體溶液的濃度為0.1-5.0mg/mL；

所述上轉換熒光納米材料選自表面無油酸且水溶解性好的上轉換熒光納米材料；

所述上轉換熒光納米材料選自粒徑為1～1000nm的球形納米材料。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述上轉換熒光納米材料選自NaYF₄:Yb,Er；

所述上轉換熒光納米材料NaYF₄:Yb,Er中稀土離子[Y³⁺]:[Yb³⁺]:[Er³⁺]的摩爾比為(50～98):(2～40):(0.5-10)。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟2)中，所述熒光受體的前體溶液的濃度為大于0mM且小于等于50mM。

5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，步驟3)中，所述孵育的溫度為20～60℃；所述孵育的時間為1～240min；所述混合在酶標板中進行混合；所述混合的熒光供體溶液、熒光受體的前體溶液和緩沖液的濃度和體積為任意比例，以使能夠得到混合液的上轉換熒光強度和熒光猝滅效率最大時混合液所對應的熒光供體溶液和熒光受體的前體溶液的濃度值即可。

6.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，步驟3)中，所述緩沖液選自Tris-HCl；所述緩沖液的濃度為10mM，所述緩沖液的pH為8.5。

7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述熒光供體溶液、熒光受體的前體溶液和緩沖液的混合具體包括如下步驟：

3-1)將上轉換納米材料水溶液與多巴胺單體水溶液混合均勻，并定容于50-1000μL的Tris-HCl緩沖溶液中，得到混合溶液；

3-2)將混合溶液于37℃恒溫振蕩混勻0.5-3小時，振蕩過程中可以觀察到溶液顏色從“無色-淺灰色-棕色-棕褐色”的變化過程，說明聚合多巴胺逐漸包覆在NaYF₄:Yb,Er納米晶表面并且隨著時間推移聚合多巴胺的厚度逐漸增加；

3-3)加入10μL 120mM的HCl溶液終止多巴胺聚合反應。

8.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，步驟4)中，所述標準曲線的繪制具體包括如下步驟：以步驟3)的熒光猝滅效率最大時對應的熒光供體溶液和熒光受體的前體溶液的濃度為標準濃度，將標準濃度的熒光供體溶液、標準濃度的熒光受體的前體溶液、緩沖液和不同濃度的待測目標物溶液混合，孵育；測定混合液的上轉換熒光強度，繪制待測目標物的濃度依賴型標準曲線。