[發(fā)明專利]甜菜孢囊線蟲的特異性SCAR標記以及快速SCAR-PCR分子檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710554037.2
• 申請日: 2017-07-09
• 公開（公告）號: CN107287316B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發(fā)明（設計）人: 彭煥;張瀛東;彭德良;李新;黃文坤;孔令安;馮曉東;趙守歧;劉慧;吳偉;張熠;高海峰
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 胡敬紅

本發(fā)明為“甜菜孢囊線蟲的特異性SCAR標記以及快速SCAR?PCR分子檢測方法”，屬植物線蟲分子檢測技術領域。甜菜孢囊線蟲的特異性SCAR標記，具有如SEQ NO1所示的核苷酸序列。甜菜孢囊線蟲快速SCAR?PCR分子檢測方法是基于甜菜孢囊線蟲RAPD特異性區(qū)設計的一組甜菜孢囊線蟲特異性引物HsSF和HsSR，能夠特異性的從甜菜孢囊線蟲中PCR擴增出長度為922bp的片段，該特異性引物和檢測方法的檢測閾值為1/256頭二齡幼蟲和10^?3白孢囊，由此本發(fā)明的引物HsSF和HsSR及其檢測方法特異性強、靈敏度高、快速、準確。在甜菜孢囊線蟲病的早期診斷和田間檢測預警等方面具有很高的應用價值。

技術領域

本發(fā)明屬植物線蟲分子檢測技術領域，涉及甜菜孢囊線蟲特異性SCAR標記全序列、特異性SCAR標記引物序列和快速SCAR-PCR分子檢測方法。

技術背景

甜菜孢囊線蟲(Heterodera schachtii Schmidt)是全世界重要檢疫性有害生物，對甜菜具有毀滅性危害(中華人民共和國進境植物檢疫性有害生物名錄，中華人民共和國農業(yè)部第862號公告(2007-05-29))。1850年Schacht首次在德國報道(Franklin,M.T..Heterodera schachtii.CIH Descriptions of plant parasitic nematodes,Set1,No.1.St Albans,UK,Commonwealth Institute of Helminthology,1972:4.)。到目前為止已在全世界的美洲、歐洲、亞洲等50多個國家或地區(qū)有分布，22個國家將該線蟲列為檢疫對象(Steele A E.Nematode parasites of sugar beets[M]//Nickle W R.Plant andinsect nematodes.New York:Marcel Dekker,1984:507-569)。甜菜胞囊線蟲是甜菜上危害最嚴重的病原生物之一，可導致甜菜產量損失25％-50％，嚴重侵染時損失更大。19世紀下半葉，歐洲因其嚴重危害，導致甜菜大幅減產，對歐洲甜菜生產造成毀滅性破壞許多糖廠倒閉。甜菜孢囊線蟲寄主范圍非常廣泛，包括23個科95個屬的218種植物，對甜菜、油菜和白菜、菠菜等農作物造成嚴重的經濟損失(Steel AE.The host range of the sugar beetnematode Heterodera schachtii Schmidt[J].Journal of American Society of SugarBeet Technology.1965,13:1965,573-603.)。研究表明，當土壤中該線蟲幼蟲的群體密度達到每克土18條時，可使菠菜減產40％、甘藍減產35％、大白菜減產24％。在歐洲每年的經濟損失已經超過了9000萬歐元，德國西部種植甜菜每年達44萬hm²，其中每年約有1/4多的甜菜面積遭受該線蟲危害，一般造成每公頃5～35t的產量損失，嚴重威脅著當地甜菜生產和制糖業(yè)(Müller J.The economic importance of Heterodera schachtii in Europe[J].Helminthologia,1999,36:205–213)。