[發明專利]測定人血漿生物樣品中的DTPA-Zn的方法

有效

• 申請號: 201710553576.4
• 申請日: 2017-07-08
• 公開（公告）號: CN107340343B
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 郭繼芬;孟繁華;虞林;李照豐
• 申請（專利權）人: 萬舒（北京）醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.測定人血漿生物樣品中的DTPA-Zn的方法，該方法使用液相色譜-串聯質譜法測定經處理的人血漿生物樣品中的DTPA-Zn的含量，包括如下步驟：

(1)生物樣品的處理：

(1a)取含有或不含有DTPA-Zn的人血漿50μL，置于1.5mL離心管中，加內標溶液即25μg/mL的EDTA-Zn水溶液20μL和水900μL使總體積為970μL，或者不加內標溶液而直接加水920μL使總體積為970μL，渦流混合3min，全部上樣于固相萃取小柱上；

(1b)上樣后依次用1mL水、1mL甲醇清洗，最后用含1％氨水的甲醇0.5mL洗脫；

(1c)收集該洗脫液，吹干，殘余物用150μL水復溶，吸取10μL進行LC-MS/MS分析；

(1d)標準曲線的制備：取不同濃度的DTPA-Zn標準系列溶液分別加至空白人血漿中，配制成相當于濃度為1、2、5、10、20、50、和100μg/mL的標準曲線血漿樣品；取該血漿樣品50μL，依次加入內標溶液20μL，水900μL，渦流混合3min，全部上樣于固相萃取小柱上，接著照以上(1b)和(1c)操作，根據LC-MS/MS分析結果繪制標準曲線，該標準曲線用于計算各種樣品中的目標物質含量；

(2)液相色譜-串聯質譜測定：

(2a)提供高效液相色譜儀和串聯質譜儀，所述高效液相色譜儀配備梯度泵和進樣器，所述串聯質譜儀配備電噴霧離子源和數據處理系統；

(2b)色譜條件：所用的分析柱為SHISEIDO Proteonavi品牌的色譜柱，其規格為5μm，250×4.6mm I.D.，柱前連接C₁₈保護柱，其規格為4×3.0mm I.D.，是美國Phenomenex公司的保護柱，流動相為體積比50:50的甲醇-2mM甲酸銨，該甲酸銨中含0.03％氨水，流速0.45mL/min；

(2c)質譜條件：電噴霧離子化源，使用TurboIonspray源，負離子方式檢測；噴射電壓為-4000V；源溫度為500℃；卷簾氣即CUR為20；碰撞氣即CAD為4；掃描方式為多反應監測即MRM，用于定量分析的離子反應分別為：

DTPA-Zn：m/z 454.2→m/z 364.3+m/z 226.6→m/z 204.5，其CE為45V，和

EDTA-Zn：m/z 353.0→m/z 263.0，其CE為15V，

掃描時間為150msec；

(3)數據處理與分析

(3a)通過上述液相色譜-串聯質譜測定得到生物樣品中的目標物質含量；和，任選的

(3b)用非房室模型計算選自下列的一下或多個藥動學參數：C_max、T_max、t_1/2、MRT、AUC_0-t、V_z、CL；其中，C_max為實測的最大血藥濃度，T_max為口服給藥后血藥濃度達峰時間，t_1/2為藥物末端消除半衰期，MRT為藥物在體內平均滯留時間，血藥濃度-時間曲線下面積AUC_0-t由梯形法計算得到，V_z為穩態時表觀分布容積，CL為清除率；以及，任選的

(3c)計算給藥的生物利用度：在等當用藥劑量下，用第二給藥方式所得AUC值除以第一給藥方式所得AUC值再乘以100％所得百分數，作為第二給藥方式相對于第一給藥方式的相對生物利用度。

2.根據權利要求1的方法，其中所述人血漿是從給予或未給予Zn-DTPA的人靜脈血置于含肝素鈉的離心管中，2000～4000g離心10～30min獲得的血漿。

3.根據權利要求1的方法，其中所獲得的人血漿任選的被置于-20℃冰箱中凍存，以等待測定。

4.根據權利要求1的方法，其中所用的內標為EDTA-Zn Na₂·xH₂O。

5.根據權利要求1的方法，其中所述固相萃取小柱在上樣前，先用1mL甲醇活化，再用1mL水平衡；或者，先用2mL甲醇活化，再用2mL水平衡。