[發明專利]用于志賀氏菌的檢測試劑盒、檢測方法及應用有效
| 申請號： | 201710552746.7 | 申請日： | 2017-07-07 |
| 公開（公告）號： | CN107287315B | 公開（公告）日： | 2020-04-14 |
| 發明（設計）人： | 王建昌;劉立兵;孫曉霞;婁巧哲;南匯珠 | 申請（專利權）人： | 河北出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/6844 | 分類號： | C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/10;C12R1/01 |
| 代理公司： | 石家莊國為知識產權事務所 13120 | 代理人： | 林艷艷 |
| 地址： | 050051 河*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 志賀氏菌 檢測 試劑盒 方法 應用 | ||
1.一種用于志賀氏菌的檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測試劑盒用于實時熒光RPA檢測志賀氏菌，以志賀氏菌侵襲性質粒抗原H基因作為靶基因，根據其保守序列設計有一對引物和一條探針，
其中，所述的一對引物和一條探針的序列如下所示：
上游引物：5'-CTGCATGGCTGGAAAAACTCAGTGCCTCTG-3'
下游引物：5'-GTTCTGACTTTATCCCGGGCAATGTCCTCC-3'
探針：5'-CCATCAGGCATCTGAAGGCCTTTTCGA-FAM-dT-THF-A-BHQ1-dT-GATACCGGCGCTCTGCTC-C3-3'。
2.如權利要求1所述的用于志賀氏菌的檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測試劑盒還包括凍干酶制劑和醋酸鎂溶液。
3.如權利要求1或2所述的用于志賀氏菌的檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測試劑盒的反應體系組成如下：2μL的10μM的上游引物，2μL的10μM的下游引物，0.6μL的10μM的探針，12.5μL的體積濃度為20％的聚乙二醇，1μL的病毒DNA模板，29.4μL的ddH2O。
4.如權利要求2所述的用于志賀氏菌的檢測試劑盒，其特征在于：所述凍干酶制劑包括1mM的脫氧核糖核苷三磷酸，90ng/μL的單鏈結合蛋白，120ng/μL的recA重組酶，30ng/μL的Bsu DNA聚合酶，30ng/μL的Exo核酸外切酶，100mmol/L的三羥甲基甘氨酸，體積濃度為20％的聚乙二醇，5mM的二硫蘇糖醇，100ng/μL的肌酸激酶。
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