[發明專利]鑒別無蠟粉不結球白菜的引物、試劑盒及鑒別方法

有效

• 申請號: 201710549794.0
• 申請日: 2017-07-07
• 公開（公告）號: CN107312845B
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 萬正杰;王燦潔;楊慶勇;夏軍輝;李藝瀟;姚培杰;劉旭佳
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種用于鑒別無蠟粉不結球白菜的引物，其特征在于，包括：

BrCER1-SF：5’-CTACCATTCCCACCACCAC-3’；

BrCER1-SR：5’-GAAAGACGCTATGGATGCCG-3’。

2.含有權利要求1所述引物的試劑盒。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括Tris-HCl、(NH₄)₂SO₄、MgCl₂、Triton X-100、dNTPs、Taq酶和模板DNA。

4.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括10mmol/L Tris-HCl、10mmol/L (NH₄)₂SO₄、10mmol/L MgCl₂、0.1% Triton X-100、0.2mmol/L dNTPs、0.5UTaq酶和100ng 模板DNA。

5.一種鑒別無蠟粉不結球白菜的方法，其特征在于，包括：

（1）提取不結球白菜植株樣品的DNA；

（2）以步驟（1）提取的DNA為模板，利用權利要求1所述引物對所述不結球白菜植株樣品進行PCR擴增；

（3）分析PCR產物；

所述不結球白菜植株樣品為白菜13S106或白菜13S126。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）具體為：

播種不結球白菜植株樣品于穴盤中，在苗期采用CTAB法提取DNA。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述CTAB法中CTAB的濃度為0.8%。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，PCR擴增體系包括：以10μL計，10mmol/L Tris-HCl、10mmol/L (NH₄)₂SO₄、10mmol/L MgCl₂、0.1% Triton X-100、0.2mmol/L dNTPs、0.5U Taq酶、100ng 模板DNA、10ng 引物BrCER1-SF和10ng BrCER1-SR。

9.根據權利要求5-8中任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中PCR反應條件為：94℃預變性1min后，94℃反應30s，55℃反應30s，72℃反應1min， 共30個循環；最后在72℃延伸8min。

10.根據權利要求5-8中任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）具體為：

將PCR擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳、EB染色后，應用凝膠圖像分析系統記錄；統計帶型，鑒別出aa基因型無蠟粉不結球白菜。