[發明專利]快速無標記的區分正常血紅蛋白和含鐵血黃素的成像方法

有效

• 申請號: 201710548472.4
• 申請日: 2017-07-07
• 公開（公告）號: CN107478637B
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 季敏標;張莉麗;鄒翔;陳亮;毛穎
• 申請（專利權）人: 復旦大學;復旦大學附屬華山醫院
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;陸尤

1.一種快速無標記的區分正常血紅蛋白和含鐵血黃素的成像方法，其特征在于，具體步驟如下：

（1）利用基于飛秒時間分辨的泵浦-探測光譜成像系統研究正常血紅蛋白和含鐵血黃素在不同探測波長下的泵浦-探測光譜特征和差異：

泵浦光波長固定為1040 nm，探測光的波長680-1030 nm可調；

用泵浦-探測光譜成像系統研究血紅蛋白和含鐵血黃素的標準樣品，得到不同探測波長下的血紅蛋白和含鐵血黃素的衰減曲線；其中，含鐵血黃素在不同的探測波長下的衰減曲線無明顯差異：都表現為正信號，且有一個長達6ps以上的長的衰減拖尾；血紅蛋白隨著探測波長的紅移表現出：在短波長探測即800nm時全為正信號且呈現雙指數衰減，衰減時間分別為0.5ps和2ps；過渡到長波探測即850nm時，在極短時間內表現為正信號，之后迅速衰減為負信號且有較長的衰減時間；

（2）選擇合適的探測波長，同時對正常血紅蛋白和含鐵血黃素進行成像：

鑒于正常血紅蛋白在大于800nm的探測波長下開始表現出負信號且隨著探測波長的紅移負信號不斷增強，而含鐵血黃素始終表現為正信號；故選擇大于800nm的探測波長，在正常血紅蛋白負信號對應的脈沖時間延遲下即1ps附近，同時對正常血紅蛋白和含鐵血黃素進行成像，且分別提取圖像中的負信號/正信號重構出正常血紅蛋白和含鐵血黃素的圖像；

（3）結合受激拉曼散射技術和泵浦-探測光技術，有選擇性的對組織、正常血紅蛋白和含鐵血黃素進行三通道成像：

受激拉曼散射技術和泵浦-探測光技術共用相同的成像系統，組織的主要組成成分脂和蛋白的受激拉曼散射峰剛好對應800nm的泵浦光和1040nm的斯托克斯光，且受激拉曼散射只發生在泵浦光脈沖和探測光脈沖完全重合的時間尺度內即0.5ps以內；正常血紅蛋白在800nm探測波長下2 ps左右就快速衰減到0；含鐵血黃素在800 nm探測波長下一直到6ps都沒有衰減到0；因此選擇800nm的探測波長，分別掃描時間延遲線到0ps、0.7ps、3ps即可有選擇性的探測組織、正常血紅蛋白和含鐵血黃素的圖像，三通道疊加即得到正常血紅蛋白和含鐵血黃素在組織中的分布。