[發明專利]一種不含外源性添加劑的富血小板血漿制備方法

有效

• 申請號: 201710547580.X
• 申請日: 2017-07-06
• 公開（公告）號: CN107376427B
• 公開（公告）日: 2019-11-26
• 發明（設計）人: 胡志奇;杜麗娟;苗勇
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學南方醫院
• 主分類號: B01D17/038
• 分類號: B01D17/038;A61K35/16;A61L27/36;A61L27/54
• 代理公司: 44202 廣州三環專利商標代理有限公司
• 代理人: 劉宇峰<國際申請>=<國際公布>=<進入

本發明涉及一種不含外源性添加劑的富血小板血漿制備方法。本發明所述的富血小板血漿制備方法包括以下步驟：樣品準備：將靜脈血全血加入已預冷的離心管中；第一次離心：對靜脈血全血進行第一次離心，180g，10分鐘；第二次離心：轉移血漿層至新的離心管內，配平，進行第二次離心，1550g，10分鐘；離心后棄去血漿上清液，保留占靜脈血全血體積的1/10的血漿上清液，重懸血小板沉淀，即制備得到所述的富血小板血漿；其中，所有操作均在低溫下進行。本發明使用物理的溫度控制調節血液的抗凝及血小板激活，避免了抗凝劑及促凝劑的加入，避免因外源性物質加入導致的臨床不良反應，保證了富血小板血漿臨床使用的安全性。

技術領域

本發明屬于血液制品技術領域，涉及一種不含外源性添加劑的富血小板血漿制備方法。

背景技術

富含血小板血漿(Platelet-rich plasma，PRP)特指含有4-5倍正常人體血小板濃度的自體血漿。血小板是巨核細胞的胞質片段，屬于白細胞范疇，在骨髓中形成。它們缺乏細胞核，但是包含細胞器，還有線粒體，微管，以及α、δ、λ微粒這些結構。其中，α顆粒包含有多種生長因子，包括：血小板源性生長因子(PDGF)、表皮生長因子(EGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、血管內皮生長因子(VEGF)、轉換生長因子(TGF-β)等。PDGF能促進巨噬細胞活化和血管生成，促進成纖維細胞增殖活性和趨化作用，增加膠原蛋白的合成，促進骨細胞的增殖。FGF能促進細胞外基質的增生，增強成纖維細胞的增殖活性，刺激I型膠原合成和誘導骨基質沉淀。TGF-β有可能抑制破骨細胞的形成和骨吸收，從而有利于骨形成。IGF是成纖維細胞趨化劑并刺激膠原蛋白合成。另外它通過骨增殖和成骨分化促進骨形成。VEGF在血管的形成過程中扮演重要的信號蛋白角色。在體外，VEGF已被證實能刺激內皮細胞有絲分裂和細胞遷移，能擴張血管，增加微血管滲透性。EGF通過與表皮生長因子受體結合，引發某些基因的表達，最終促進DNA合成增加和細胞的增殖。由于PRP具有上述諸多的作用，故已被廣泛應用于皮膚科、骨科、頜面外科和整形外科等諸多領域。

目前，國內外關于PRP的制備方法及已上市的成商品化PRP提取裝置眾多，用不同的方法制備的PRP，所獲取的血小板濃度和活性不一，但首先均需要進行血液抗凝處理。目前常用的獲FDA及CFDA批臨床提取PRP常用的抗凝劑為ACD-A(主要成分為枸櫞酸鈉)。此外，當PRP在體外應用或將PRP做止血劑或組織包埋的媒介時，都必須應用激活劑，即體外激活血小板。最常用的體外激活方法是添加10％氯化鈣和凝血酶啟動凝血過程，可以得到PRP凝膠和釋放物，再經過快速離心后就可得到生長因子。

雖然現有技術制備的PRP具有一定的臨床應用價值，但是其存在的抗凝劑及促凝劑等外源性添加劑仍存在一定程度上的缺陷，如：1)枸櫞酸鈉會引起血小板聚集，同時在一定程度上會破壞血小板，從而影響血小板計數，無法準確獲得具有臨床意義上的PRP，高濃度枸櫞酸鈉可引起枸櫞酸鈉中毒反應，其與血液中的鈣離子結合使血鈣降低，從而表現出手足抽搐、出血傾向、血壓下降、心率緩慢甚至心跳驟停；2)凝血酶不良反應，在體外凝血酶的濃度可影響細胞的增殖、組織因子及炎癥因子的釋放，高濃度時具有神經毒性，抑制細胞的增殖，甚至引起腦細胞死亡。

發明內容

技術問題

本發明的目的在于提供一種不含外源性添加劑的富血小板血漿制備方法，該方法通過單純調控溫度制備出高濃度的富血小板血漿，不需添加外源性抗凝劑或促凝劑，確保富血小板血漿臨床使用的安全性及有效性。

技術方案

本發明的目的通過以下技術方案予以實現：