[發明專利]月季花瓣中類黃酮色素的高效快速提取及測定方法

有效

• 申請號: 201710547497.2
• 申請日: 2017-07-06
• 公開（公告）號: CN107505405B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 張啟翔;萬會花;韓瑜;程堂仁;王佳;于超;潘會堂;李生;蔡勇;喬亞西;王李亮
• 申請（專利權）人: 北京林業大學;江蘇蘇北花卉股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.月季花瓣中類黃酮色素的高效快速提取及測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、稱取類黃酮標準品，用浸提劑溶解，制備類黃酮標準品溶液；

S2、向月季花瓣樣品中加入浸提劑，在均質破碎儀上研磨，利用超聲波輔助提取，制備類黃酮待測樣品溶液；

S3、高效液相色譜分析；

S4、液質聯用分析，獲得月季花瓣中類黃酮的質譜信息；

S5、根據保留時間、紫外可見吸收光譜圖、質譜圖、類黃酮標準品對月季花瓣樣品中類黃酮的結構進行鑒定；

S6、根據類黃酮標準品的線性回歸方程，對月季花瓣樣品中的類黃酮進行定量分析；

步驟S1和S2中使用的浸提劑為甲醇、水、甲酸和三氟乙酸按70：27：2：1體積比的配制的混合液；

步驟S2中利用超聲波清洗器進行超聲輔助提取，功率100％，提取時間30min，期間通過加入冰塊降溫使提取溫度不超過25℃；

步驟S2中使用的均質破碎儀為MP FastPrep-24，運行速度5m/s，研磨時間30s；

步驟S2具體為：稱量0.15-0.25g月季花瓣樣品，置于液氮速凍后的2ml研磨管中，迅速加入0.9ml浸提劑，進行自動研磨；然后再加入0.9ml浸提劑，進行超聲波輔助提取；然后將提取液進行離心；最后將上清液用0.22μm微孔濾膜過濾，裝于2ml安捷倫上樣小瓶中，用于高效液相色譜檢測分析；

步驟S3中使用的色譜柱為XBridge BEH C18，規格150mm×4.6mm，2.5μm，流動相為乙腈和0.5％甲酸水溶液，梯度洗脫，流速為0.5ml/min，進樣量10μl，柱溫箱溫度25℃，200-600nm全波長掃描，花青苷檢測波長520nm；黃酮醇檢測波長350nm；

梯度洗脫條件為：0min，5％乙腈；5min，10％乙腈；30min，19％乙腈；50min，40％乙腈；50.01-60min，5％乙腈；

步驟S4中采用HPLC-microTOF-Q MS液質聯用儀獲得質譜信息；全掃描電噴霧電離，正/負離子模式，掃描范圍100-1000m/z，毛細管電壓3500V，毛細管出口電壓500V，干燥溫度350℃，干燥和噴霧氣體為氮氣，流速為8.0L/min，正、負離子模式的碰撞電壓分別為8.0eV和10.0eV；

對正/負離子模式下的掃描結果基于保留時間進行離子提取，得到每個峰對應的質譜信息；

測得月季花瓣中所含類黃酮色素的結構和性質表征如下：

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S6具體為：記錄各種類黃酮色素標準品每個濃度對應的峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制各標準品的標準曲線，得到相應的線性回歸方程；然后將鑒定出的類黃酮色素的峰面積代入對應標準品的回歸方程中，計算得到待測樣品中對應物質的含量，如果鑒定出的類黃酮色素與8種標準品均不相同，則利用與其結構最相近的標準品的回歸方程來計算含量。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1具體為：稱取2mg類黃酮標準品，加入4ml浸提劑配制成濃度500μg/ml的母液，然后依次稀釋2倍，得到6個濃度梯度的標準品溶液，用以繪制標準曲線；

其中，所述類黃酮標準品包括矢車菊-3,5-雙氧葡萄糖苷、天竺葵-3,5-雙氧葡萄糖苷、蘆丁、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷、槲皮素和山奈酚。