[發明專利]一種基于SPEXIN的結直腸癌輔助診斷和/或預后判斷試劑盒及應用

在審

• 申請號: 201710546255.1
• 申請日: 2017-07-06
• 公開（公告）號: CN107287310A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 陳衛東;呂雙瑜;王艷東;周云;聶小博;王群
• 申請（專利權）人: 河南大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 新鄉市平原智匯知識產權代理事務所(普通合伙)41139
• 代理人: 周闖

技術領域

本發明屬于腫瘤分子生物學技術領域，具體涉及一種基于SPEXIN的結直腸癌輔助診斷和/或預后判斷試劑盒及應用。

背景技術

結直腸癌（colorectal cancer，CRC）是嚴重威脅人類生命健康的惡性腫瘤之一。世界流行病學調查表明，結直腸癌在各類惡性腫瘤中的發病率居第3位。隨著經濟發展和人民生活水平的提高，生活方式和飲食結構的改變，在我國其發病率在各種居惡性腫瘤僅次于肺癌及乳腺癌居第3位，死亡率居第4位。而且據預測，我國結直腸癌的發病率和死亡率在今后相當長一段時間內將呈穩步上升趨勢，成為我國最常見、高發病率的惡性腫瘤之一，已經成為嚴重威脅人民的健康。

結直腸癌的發生與飲食環境遺傳等密切相關，是多種因素共同作用的結果，結腸癌的防治研究已不斷引起人們的重視。由于結直腸癌臨床前期無癥狀，且持續時間較長，因此對結直腸癌的早期診斷和篩查并及時進行治療，有助于降低結直腸癌的發病率及死亡率。腫瘤分子標志物是指腫瘤細胞在癌變過程中由于基因表達的增加或降低導致其含量改變的一些蛋白或生物活性物質，可用于腫瘤診斷，檢測腫瘤過程以及患者愈后評定，它對腫瘤的臨床治療產生了很大的影響。所以尋找較高靈敏性和特異性的腫瘤分子標志物，對結直腸癌的診斷是十分有必要的。通過尋找新的結直腸癌標志基因，對預測結直腸癌的發生發展治療效果有一定的臨床指導意義。目前，基因診斷技術的建立和發展為結直腸癌的早期輔助診斷和預后判斷提供了途徑。

SPEXIN蛋白最早是由Mirabeau團隊基于隱馬爾可夫模型（HMM）的生物信息學搜索策略首次鑒定發現。人SPEXIN基因（Ch12, orf39；～17,333 bp）位于染色體12p12.1。SPEXIN 基因和蛋白廣泛在人類和嚙齒類動物的中樞神經系統和外周組織都有分布。SPEXIN蛋白參與機體能量代謝、心血管、食欲等生理和病理功能的調節。然而，SPEXIN基因和/或蛋白對結直腸癌的作用迄今尚未見報道。

目前臨床上常用的用于結直腸癌早期診斷的標志物在特異性和靈敏度方面尚存在一些不足。隨著對癌癥發生發展過程中分析信號的闡明，新的腫瘤標志物可能會出現。分子生物學的不斷發展以及基因工程技術的不斷進步，尋找和利用新的且敏感度高的標志基因，可有效地進行分子水平的檢測和診斷，進而為這些疾病的早期診治和預防提供有利條件。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于SPEXIN的結直腸癌輔助診斷和/或預后判斷試劑盒，該試劑盒能特異檢測出SPEXIN基因的表達有無下調，從而作為結直腸癌的診斷依據。該試劑盒檢測靈敏度高、特異性強。

本發明的目的通過以下技術方案實現：一種基于SPEXIN的結直腸癌輔助診斷和/或預后判斷試劑盒，所述試劑盒包括引物對Ⅰ和引物對Ⅱ；所述引物對Ⅰ的正向序列如SEQ ID NO：1 所示（cacagagcct cgcctttgc），反向序列如SEQ ID NO：2所示（ccaccatcac gccctgg ）；所述引物對Ⅱ的正向序列如SEQ ID NO：3所示（tccgcagaga ctgttggaga），反向序列如SEQ ID NO：4所示（gttgctgcct ccggaatagt）。

所述的基于SPEXIN的結直腸癌輔助診斷和/或預后判斷試劑盒，還包括試劑Ⅰ、試劑Ⅱ和溶液組，溶液組包括溶液a-i, 試劑Ⅰ、試劑Ⅱ及溶液a-i的組成如下：

。

所述的基于SPEXIN的結直腸癌輔助診斷和/或預后判斷試劑盒的應用，其特征在于包含如下操作步驟：

（1）從受試者的血液或結直腸組織提取總RNA；

（2）檢測樣本和對照中SPEXIN的表達水平；

（3）分別對樣本和對照中SPEXIN的水平進行分析評估。

所述步驟（1）中結直腸組織為結直腸癌組織或癌旁組織。

所述步驟（2）為：將步驟（1）提取的總RNA反轉錄成的cDNA作為模板，以引物對Ⅰ為模板的檢測結果作為內參基因表達量、以引物對Ⅱ為模板時的檢測結果作為目的基因SPEXIN表達量。

所述步驟（2）中SPEXIN的表達水平是指SPEXIN基因、SPEXIN多肽、SPEXIN蛋白質、SPEXIN多肽的結構衍生物或SPEXIN蛋白的功能類似物的水平。