[發明專利]一種油氣微生物勘探方法有效
| 申請號： | 201710545896.5 | 申請日： | 2017-07-06 |
| 公開（公告）號： | CN107267623B | 公開（公告）日： | 2018-06-08 |
| 發明（設計）人： | 羅楚平;鮑浩然 | 申請（專利權）人： | 羅楚平;鮑浩然 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12Q1/64 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 436034 湖北省*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 油氣微生物勘探 熒光定量PCR檢測 微生物培養法 丁烷氧化菌 平面矩陣 采樣點 低級烴 勘探區 氧化菌 井位 采集 檢測 | ||
1.一種油氣微生物勘探方法，其特征在于包括以下步驟：
(1)在勘探區內設置采樣點平面矩陣，結合勘探區地形和平面矩陣確定采樣點的坐標；
(2)采集樣品，樣品的采樣量為10-100g，采樣深度為20-60cm，所采集的樣品在0至-20℃保存和運輸；
(3)利用選擇性培養基通過微生物培養法檢測丁烷氧化菌的含量，繪制等值線，確定丁烷氧化菌培養異常區，通過選擇培養法檢測丁烷氧化菌的含量，先采用以丁烷為唯一碳源的液體培養基進行富集，再以丁醇為唯一碳源的固體平板通過平板稀釋法檢測樣本中丁烷氧化菌的含量，所述選擇性培養基中包括K2HPO4 1.75g，KH2PO4 0.96g，NaNO3 2.0g，MgCl20.1g，(NH4)2SO4 0.1g，微量元素0.2mL，pH為7.2；其中每升微量元素中含有CaCl2 5.54g，ZnCl2 5.3g，MnCl2 5.06g，FeSO4 4.99g，(NH4)6Mo7O24 1.10g，CuSO4 1.57g，CoCl2 1.61g；
(4)對丁烷氧化菌培養異常區的樣本進行實時熒光定量PCR檢測，所述實時熒光定量PCR針對低級烴氧化菌的特異性保守區或功能區進行檢測，采用SYBR Green I熒光染料進行定量，所述低級烴氧化菌包括甲烷氧化菌、乙烷氧化菌和丙烷氧化菌；
(5)根據實時熒光定量PCR的結果，選擇候選勘探區；
(6)在微生物培養結果、熒光定量PCR結果的基礎上，結合地表溫度、土壤巖性、土壤pH值、土壤鹽度、地表植被等因素，確定井位候選點；
其中：不使用微生物培養法檢測甲烷氧化菌、乙烷氧化菌和丙烷氧化菌的含量，并且不使用實時熒光定量PCR檢測丁烷氧化菌的含量。
2.如權利要求1所述油氣微生物勘探方法，其特征在于步驟(1)中勘探區域內平面矩陣的網格密度為200-500m×100-250m。
3.如權利要求1所述油氣微生物勘探方法，其特征在于步驟(2) 中采樣深度為40cm，所采集的樣品在-20℃保存和運輸。
4.如權利要求1所述油氣微生物勘探方法，其特征在于所述以丁烷為唯一碳源的富集方法如下：在無菌操作臺上稱取1g土壤樣品置于盛有50mL液體培養基的150mL三角瓶中，向培養基液面以下充入丁烷氣使培養液中丁烷氣達到飽和，并使三角瓶中的氣體空間充滿丁烷氣，封口，180rpm 28℃震蕩培養7d。
5.如權利要求1所述油氣微生物勘探方法，其特征在于所述以丁醇為唯一碳源的固體平板中含有5％的丁醇作為碳源。
6.如權利要求1所述油氣微生物勘探方法，其特征在于步驟(4)中熒光定量PCR檢測針對的靶基因為低級烷氧化酶基因。
7.如權利要求6所述油氣微生物勘探方法，其特征在于檢索GenBank數據庫中各低級烷氧化酶基因序列，進行多重比對，針對保守區序列設計熒光定量PCR引物。
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