[發明專利]用于鑒別遼參的實時熒光PCR引物檢測方法及應用在審
| 申請號： | 201710544920.3 | 申請日： | 2017-07-06 |
| 公開（公告）號： | CN109234424A | 公開（公告）日： | 2019-01-18 |
| 發明（設計）人： | 李君 | 申請（專利權）人： | 大連長生島集團有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 大連非凡專利事務所 21220 | 代理人： | 閃紅霞 |
| 地址： | 116000 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 實時熒光PCR 特異引物 通用引物 遼參 核苷酸序列 鑒別 擴增曲線 通用引物對 待測樣品 引物檢測 低成本 擴增 樣本 檢測 應用 | ||
1.一種用于鑒別遼參的實時熒光PCR引物,其特征在于所述引物核苷酸序列如下：
特異引物：
上游引物HS-COIF：5'TCCAGACATGGCTTTCCCAC 3'，
下游引物HS-COIR：5'AGAATTGAGGAGGCACCAGC 3'；
通用引物：
上游引物HS-16SF：5'AAAACAGAAAGACGAGAAGACCCT 3'，
下游引物HS-16SR：5'CGCTGTTATCCCTGCGGTAG 3'。
2.一種用于鑒別遼參的實時熒光PCR方法，其特征在于依次按照如下步驟進行：
a. 提取待測樣品DNA；
b. 以所得到的DNA為模板,分別以特異引物和通用引物進行實時熒光PCR擴增，所用引物的核苷酸序列如下：
特異引物：
上游引物HS-COIF：5'TCCAGACATGGCTTTCCCAC 3'，
下游引物HS-COIR：5'AGAATTGAGGAGGCACCAGC 3'；
通用引物：
上游引物HS-16SF：5'AAAACAGAAAGACGAGAAGACCCT 3'，
下游引物HS-16SR：5'CGCTGTTATCCCTGCGGTAG 3'；
c.分別檢測特異引物和通用引物進行實時熒光PCR擴增曲線Ct值, 如特異引物和通用引物實時熒光PCR均有擴增曲線Ct值,則被測樣本為遼參。
3.根據權利要求2所述用于鑒別遼參的實時熒光PCR方法，其特征在于所述實時熒光PCR擴增的反應體系為: 2×SYBRGreen Mix 10 μL，濃度1 μmol/mL的引物各0.2~1μL，50×Rox0.4 μL，濃度1~20 ng/μL 的DNA模板2.0 μL，用雙蒸水補足至20 μL；反應條件為95℃，2min；95℃，10s；64℃，35s，檢測熒光信號；40個循環。
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