[發明專利]一種枸杞多糖精制的方法

在審

• 申請號: 201710544801.8
• 申請日: 2017-07-06
• 公開（公告）號: CN107163162A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 王仲孚;龔桂萍;孫靜;黃琳娟
• 申請（專利權）人: 西北大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P39/06;A61P37/04
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙)61223
• 代理人: 俞曉明

技術領域

本發明屬于枸杞多糖分離純化技術領域，具體涉及一種枸杞多糖精制的方法。

背景技術

枸杞屬茄科，主要分布于我國西北地區，已用作傳統中藥超過2000多年，目前在東亞、歐洲、北美和國內廣泛作為功能性食品，市場份額大。研究表明，枸杞子富含多種活性成分，其中包括18種氨基酸(8種人體必須氨基酸)、21種微量元素、黃酮、蛋白、多糖、類胡蘿卜素等。

枸杞多糖是枸杞子最主要的活性成分之一，具有多種生物活性如降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老、抗疲勞等，同時還具有免疫調節活性，如促進T細胞、B細胞增值，能夠促進NO等細胞因子產生。自然界中的活性多糖大多屬于鼠李糖半乳聚糖型、阿拉伯聚糖型、阿拉伯半乳聚糖型和果膠類多糖等類型。多糖的理化性質和結構決定了其生物活性，而理化性質和結構受其提取和分離純化方法的影響，因此枸杞多糖的提取分離純化工藝對枸杞多糖的生物活性尤為重要。

現有技術中，枸杞多糖主要是通過水提醇沉透析冷凍干燥得枸杞粗多糖，枸杞粗多糖經陰離子交換柱層析，凝膠過濾柱層析等復雜過程才能得到純度較高的枸杞多糖，收率低，且易丟失活性多糖組分，難以全面評價枸杞多糖的功能。

發明內容

本發明提供的一種枸杞多糖精制的方法，解決了現有技術的枸杞多糖分離純化方法操作復雜，得率低，容易丟失活性組分，難以全面評價枸杞多糖的功能的問題。

本發明的第一個目的是提供一種枸杞多糖精制的方法，包括以下步驟：

步驟1，枸杞多糖的提取

步驟1.1，將枸杞子粉碎后，室溫浸泡于相當于枸杞子重量3倍體積的蒸餾水中，浸泡24h，離心，收集上清液，濃縮，向濃縮液中加入無水乙醇沉淀，離心，收集沉淀物；

步驟1.2，向所述沉淀物中加入蒸餾水，得到復溶液；然后向復溶液中加入相當于復溶液1/5體積的Sevage試劑，300r/min攪拌15min，離心，收集上清液；

步驟1.3，重復步驟1.2的操作數次直至無沉淀，將最后一次上清液用玻璃紙透析，收集袋內溶液，冷凍干燥，得到枸杞粗多糖；

步驟1.4，將枸杞粗多糖用蒸餾水復溶后，再用截留分子量為8-14KDa的透析袋透析，收集透析袋內透析液，離心，收集上清液冷凍干燥，得到大分子枸杞多糖；收集透析袋外溶液，濃縮冷凍干燥，得到小分子枸杞多糖；

步驟2，大分子枸杞多糖的精制

將大分子枸杞多糖配成水溶液，加入無水乙醇，使乙醇的體積分數為30％，沉淀12h，離心收集第一次多糖上清液和第一次多糖沉淀，向第一次多糖沉淀中加蒸餾水復溶，離心，收集的上清液經冷凍干燥，得到初級純化的第一個枸杞多糖組分；

接著向第一次多糖上清液中加入無水乙醇，使乙醇的體積分數為50％，沉淀12h，離心收集第二次多糖上清液和第二次多糖沉淀，向第一次多糖沉淀中加蒸餾水復溶，離心，收集的上清液經冷凍干燥，得到初級純化的第二個枸杞多糖組分；

繼續向第二次多糖上清液中加入無水乙醇，使乙醇的體積分數為70％，沉淀12h，離心收集第三次多糖沉淀，向第三次多糖沉淀中加蒸餾水復溶，離心，收集的上清液經冷凍干燥，得到初級純化的第三個枸杞多糖組分；

將初級純化的第一、二、三個枸杞多糖組分分別經Sephadex G-100柱層析分離純化，分別得到第一、二、三個高純度枸杞多糖。

優選的，上述的枸杞多糖精制的方法，步驟1.1、步驟1.2、步驟1.4和步驟2中離心條件均為8000r/min離心10min。

優選的，上述的枸杞多糖精制的方法，步驟1.1的具體操作為：將枸杞子粉碎后，加入相當于枸杞子重量3倍體積的蒸餾水，混勻，用1mol/L氫氧化鈉溶液調pH至7.0，浸泡24h，8000r/min離心10min，收集第一次上清液和第一次沉淀；向第一次沉淀中加入相當于枸杞子重量1.5倍體積的蒸餾水，浸泡6h，8000r/min離心10min，收集第二次上清液；合并第一次上清液和第二次上清液，并將其濃縮；然后向濃縮液中加入相當于濃縮液4倍體積的無水乙醇，沉淀12h后，8000r/min離心10min，收集沉淀物。

優選的，上述的枸杞多糖精制的方法，所述Sevage試劑由二氯甲烷與正丁醇按照4:1的體積比例混合而成。