[發明專利]地衣芽孢桿菌HLS及其結球方法與應用

有效

• 申請號: 201710542775.5
• 申請日: 2017-07-05
• 公開（公告）號: CN107129955B
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發明（設計）人: 汪春蕾;孫海瓊;趙敏;陶雷;吳瑩;李德斌;汪傲
• 申請（專利權）人: 東北林業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A62D3/02;C12R1/10;A62D101/28;A62D101/26
• 代理公司: 哈爾濱市偉晨專利代理事務所(普通合伙) 23209
• 代理人: 榮玲

本發明公開了一種地衣芽孢桿菌HLS及其結球方法與應用，所述地衣芽孢桿菌HLS的分類命名為地衣芽孢桿菌(Bacillus Licheniformis)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號：CGMCC NO.14106，保藏日期：2017年5月8日，其結球方法如下：一、將地衣芽孢桿菌HLS接種至100mL的LB液體培養基中，37℃，170rpm，過夜培養；二、將培養好的液體菌以1％的接種量接種至100mL含有0.4～0.9mmol/L Cu²⁺的LB液體培養基中，37℃，170rpm過夜培養，得到地衣芽孢桿菌HLS菌球。本發明篩選得到的地衣芽孢桿菌HLS在一定的培養條件下能夠形成菌球，該菌球可以重復使用用于對染料脫色，因此省略了制備固定化細胞的過程。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，涉及一株地衣芽孢桿菌(Bacillus Licheniformis)HLS及其結球方法與應用。

背景技術

在紡織、治金和日化等行業生產中需要用到大量染料，大多染料的結構較為復雜，穩定性較高，可降解性差，在生產過程中對環境的污染嚴重，染料廢液的處理有待研究。傳統的物理或化學處理方法在降解過程中會造成二次污染，采用生物學方法處理染料是較為環保的方式，利用酶制劑處理染料廢水不僅效率高，而且操作簡單。漆酶是在染料脫色方面應用最為廣泛的一種酶制劑。

地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)為芽孢桿菌屬的革蘭氏陽性菌，對外界有害因子抵抗力強，在極端環境中細胞質高度濃縮脫水形成芽孢，能夠耐受高溫、強酸和強堿等環境。地衣芽孢桿菌的芽孢蛋白具有漆酶的活性，漆酶能夠催化許多芳香族化合物并有廣泛的作用底物，可以降解環境中的有毒有害物質，去除染料及土壤中的雜酚油類物質，對于環境污染物的消除起著很大的作用。但天然酶穩定性差、易失活及不能重復使用，固定化酶技術克服了游離酶的不足，提高了酶的穩定性，降低了成本。目前關于地衣芽孢桿菌可以結球的報道很少。通過研究小球的特性及對不同類型染料的脫色效果，可以進一步推動芽孢桿菌在環境治理方面的應用。

發明內容

本發明的目的是提供一株地衣芽孢桿菌HLS及其結球方法與應用，該地衣芽孢桿菌HLS在培養過程中產生了一種粘性小球，該小球能夠使染料脫色，并可以重復使用，天然形成了固定化酶。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

地衣芽孢桿菌HLS，分類命名為地衣芽孢桿菌(Bacillus Licheniformis)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址在北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國微生物研究所，保藏編號：CGMCC NO.14106，保藏日期：2017年5月8日。

本發明的地衣芽孢桿菌HLS細胞大小為(0.5～0.8μm)×(1.5～2.5μm)，菌落乳白色、呈圓形，表面干燥光滑，培養3天后的菌落產生紅色素。

本發明的地衣芽孢桿菌HLS的V-P試驗呈陽性，硝酸鹽還原試驗呈陽性，硝酸鹽產氣試驗呈陽性。地衣芽孢桿菌HLS可利用麥芽糖、甘露糖、果糖、葡萄糖、甘露醇、阿拉伯糖和蔗糖，地衣芽孢桿菌HLS可水解淀粉和明膠，地衣芽孢桿菌HLS為發酵型。

本發明的地衣芽孢桿菌HLS可在LB培養基上生長，最適生長溫度為37℃，最適生長pH為7.0。

本發明的地衣芽孢桿菌HLS的16S rDNA序列只與地衣芽孢桿菌同源性為99％，結合菌體形態和生理生化特性，鑒定該菌株HLS為地衣芽孢桿菌(Bacillus Licheniformis)。

上述地衣芽孢桿菌HLS的結球方法，包括如下步驟：

一、將地衣芽孢桿菌HLS接種至100mL的LB液體培養基中，37℃，170rpm，過夜培養；