[發(fā)明專利]白紋伊蚊唾液34K2重組蛋白在DENV2感染HaCaT細胞中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710542440.3
• 申請日: 2017-07-05
• 公開（公告）號: CN107236028B
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發(fā)明（設計）人: 吳家紅;商正玲;程金芝;馬亞萍
• 申請（專利權）人: 貴州醫(yī)科大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 昆明金科智誠知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 53216
• 代理人: 胡亞蘭

1.一種白紋伊蚊唾液34K2重組蛋白在研究DENV2感染HaCaT細胞中的應用，其特征在于，所述34K2重組蛋白促進DENV2在HaCaT細胞中的增殖，并誘導感染DENV2的HaCaT細胞發(fā)生凋亡。

2.根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于：是利用實時無標記細胞動態(tài)分析法監(jiān)測不同濃度的白紋伊蚊唾液34K2重組蛋白對HaCaT細胞生長的影響。

3.根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于：通過DENV2NS1基因/內(nèi)參基因GAPDH RNA的比值對病毒核酸相對表達量進行統(tǒng)計學分析。

4.根據(jù)權利要求3所述的應用，其特征在于：所述統(tǒng)計學分析，包括以下步驟：

(1)以感染DENV2的HaCaT細胞的RNA逆轉錄的cDNA為模板，用引物NS1 F(SEQ ID NO：1)和NS1R(SEQ ID NO：2)、引物GAPDH F(SEQ ID NO：3)和GAPDH R(SEQ ID NO：4)分別對NS1基因和GAPDH基因的進行PCR擴增；

(2)擴增產(chǎn)物經(jīng)純化回收后進行10^-3-10^-9的梯度稀釋用作模板；

(3)用qRT-PCR檢測不同濃度梯度下各基因的擴增參數(shù)，建立標準曲線；

(4)根據(jù)標準曲線對不同濃度白紋伊蚊唾液34K2重組蛋白對DENV2感染HaCaT細胞中病毒核酸進行動態(tài)檢測并進行統(tǒng)計學分析。

5.根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于：所述的白紋伊蚊唾液34K2重組蛋白在研究DENV2感染HaCaT細胞中調(diào)控細胞表達因子的應用。

6.根據(jù)權利要求5所述的應用，其特征在于：是利用qRT-PCR實時檢測不同濃度的白紋伊蚊唾液34K2重組蛋白對DENV2感染HaCaT細胞中IFN-α/β、IL-1β、TNF-α及IL-10的mRNA變化的影響。

7.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于：所述qRT-PCR的反應程序為95℃，8min；95℃，30S；60℃，30S；72℃延伸30S，35個循環(huán)；72℃延伸10min。

8.根據(jù)權利要求7所述的應用，其特征在于：是采用流式細胞術檢測白紋伊蚊唾液34K2重組蛋白對DENV2感染前后HaCaT細胞凋亡的影響。