[發明專利]一種通過固體動態發酵技術制備高活性人參皂苷的方法

在審

• 申請號: 201710537769.0
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107308195A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 肖永坤;王東明;欒桂花
• 申請（專利權）人: 肖永坤
• 主分類號: A61K36/258
• 分類號: A61K36/258;A61K36/25;A23L33/105;A61K8/9789;A61Q19/00
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1.一種通過固體動態發酵技術制備高活性人參皂苷的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)以人參屬植物的植株組織為主要原料，并添加麥麩、麥草、谷物粉、稻殼中的至少一種，以及水和其他誘導物，充分攪拌、混勻后，迅速加熱至100℃以上，并保持2～30分鐘進行滅菌，然后迅速冷卻至45℃以下；

2)滅菌后，接入菌株，菌株為經過分離篩選的能夠產生人參皂苷水解酶的單一菌株，接菌量為培養基總重量的0.001％～50％；通過轉動發酵罐充分攪拌培養基，并通入無菌空氣；先保溫培養10～36h，待微生物繁殖產熱后，再降溫繼續培養；發酵過程中，培養基根據菌株特性維持在最適溫度范圍內，即26～30℃；動態發酵培養3～15天后，發酵產物即為富含C-K、F2的高活性參制品；

3)上步獲得的發酵產物內添加低級醇浸泡、提取，即得低糖基人參皂苷的提取液；提取液經分離純化、真空減壓濃縮、真空或噴霧干燥后，獲得高活性的稀有人參皂苷C-K、F2的混合物或單體；

4)提取過后的濾渣，用水或緩沖液提取水解酶；

5)利用第4步提取的水解酶，可以對第3步提取的人參皂苷進行轉化，生成C-K或(和)Rh2；也可以利用水解酶進一步水解C-K、Rh2生成二醇類皂苷元；也可以水解原二醇類皂苷PPD制備低糖基皂苷、二醇類皂苷元。

2.如權利要求1所述的通過固體動態發酵技術制備高活性人參皂苷的方法，其特征在于，所述的人參屬植物的植株組織，包括人參、西洋參、三七參、竹節參、珠子參的根、莖、葉、種子、花、果實；所述的誘導物為人參屬植物的植株組織或其提取物，或槐花、豆粕、淫羊藿、蘆丁、黃芩中的任意一種。

3.如權利要求1所述的通過固體動態發酵技術制備高活性人參皂苷的方法，其特征在于，除水外，人參屬植物的植株組織、麥麩、麥草、谷物粉的總添加量占比為60％以上，誘導物的占比為40％以下。

4.如權利要求1所述的通過固體動態發酵技術制備高活性人參皂苷的方法，其特征在于，步驟1)中，還可以選擇性加入稻殼等碎硬之物。

5.如權利要求1所述的通過固體動態發酵技術制備高活性人參皂苷的方法，其特征在于，所述的無菌空氣由空壓機產生，并經過空氣過濾器除菌獲得。

6.如權利要求1所述的通過固體動態發酵技術制備高活性人參皂苷的方法，其特征在于，步驟3)中，提取物也可以經過溶劑萃取純化，或大孔吸附樹脂分離、脫色樹脂脫色、有機溶劑結晶、硅膠柱層析、制備色譜純化、結晶，制備高純度的F2或C-K單體。

7.如權利要求1所述的通過固體動態發酵技術制備高活性人參皂苷的方法，其特征在于，所述的水提取水解酶的過程如下：發酵產物用低級醇提取3次后，再向殘渣中加入2～6倍水，在40～75℃提取人參皂苷水解酶2次，得到人參皂苷水解酶提取液；提取液在40～60℃，-0.01Mpa～-1Mpa下減壓濃縮至50Brix以上，得到活性人參水解酶A。

8.如權利要求1所述的通過固體動態發酵技術制備高活性人參皂苷的方法，其特征在于，所述的緩沖液提取水解酶的過程如下：向殘渣中加入2～6倍檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液或磷酸鹽緩沖液或乙酸-乙酸鈉緩沖液，緩沖液的pH值為4.2～6.8，濃度為0.005～0.1M；浸泡10分鐘以上，過濾型離心機離心除雜，所得到的澄清液即為粗酶液；粗酶液用硫酸銨或酒精浸泡后，再用澄清型離心機收集沉淀酶蛋白，即得固態型活性人參水解酶B。

9.根據權利要求1所述的通過固體動態發酵技術制備高活性人參皂苷的方法，其特征在于，所述步驟5)中，酶轉化過程中：若使用活性人參水解酶A，酶解產物主要為人參次苷；若使用活性人參水解酶B，酶解產物主要為人參皂苷C-K；若聯合使用，酶解產物中含有人參皂苷元；在酶轉化過程中，可以加入有機酸調節酸度。

10.如權利要求1-9任意一種所述的通過固體動態發酵技術制備高活性人參皂苷的方法，其特征在于，所得到的活性人參制品，低糖基皂苷及苷元的混合物、單體，既可以直接使用，也可以添加到功能食品、保健品、化妝品、藥品中。