[發明專利]一種凡納濱對蝦血藍蛋白抗菌肽及其應用

在審

• 申請號: 201710534320.9
• 申請日: 2017-07-03
• 公開（公告）號: CN107501411A
• 公開（公告）日: 2017-12-22
• 發明（設計）人: 章躍陵;黃河;楊燊;劉尚杰;倫鏡盛
• 申請（專利權）人: 汕頭大學
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;A61K38/10;A61P31/04
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司44202
• 代理人: 溫旭,張澤思

技術領域

本發明涉及水產養殖的技術領域，尤其涉及一種凡納濱對蝦血藍蛋白抗菌肽及其應用。

背景技術

近年來，隨著經濟的發展，人們對水產品的需求日益增加，在捕撈量不能滿足市場需求的情況下，水產養殖業得到了迅猛的發展。對蝦是水產養殖中增長最快的產品之一，我國是養殖對蝦年產量最高的國家。然而，與國際對蝦養殖業相比，我國、我省對蝦養殖業相對效益較低、發展后勁不足，可持續發展前景不容樂觀。究其原因，主要與目前我國對蝦養殖病害頻發和生物安全所致對蝦出口屢遭貿易壁壘等有關。

血藍蛋白又稱血藍素，是一種多功能蛋白，過去被稱為呼吸蛋白，它是位于節肢動物和軟體動物血淋巴中的含銅呼吸蛋白，是節肢動物和軟體動物血淋巴中發現的含銅的藍綠色高分子量蛋白質，是氧的傳遞體，并且是已知的能與氧氣可逆結合的唯一銅蛋白。

抗菌肽(Antibac-terial peptide)又叫抗微生物肽(Antimicrobial pep-tide)、抗生素肽(Antibiotics peptide)，是由多種生物細胞特定基因編碼經外界條件誘導產生的一類具有廣譜抗細菌、真菌、病毒、原蟲、抑殺腫瘤細胞等活性作用的多肽。迄今為止，國內外報道大約有2000多種抗菌肽被鑒定、分離出來，以天然抗菌肽作模板進行人工合成的模擬肽已達數千種。在生物界自然存在的抗菌肽根據其結構的不同可以分為四大類：β折疊型抗菌肽、α螺旋型抗菌肽、延伸結構型多肽和loop結構型多肽。

目前，我國對蝦養殖業急需解決的共性關鍵問題包括：對蝦傳染性疫病的防控、品種的選育、營養研究、養殖環境控制以及對蝦加工技術升級等。而要成功解決這些問題，闡明對蝦免疫防御機制是前提和基礎。有鑒于此，本發明人研究和設計了一種凡納濱對蝦血藍蛋白抗菌肽及其應用，本案由此產生。

發明內容

本發明的目的在于提供一種凡納濱對蝦血藍蛋白抗菌肽及其應用，通過凡納濱對蝦血藍蛋白抗菌肽B2構效關系的研究，為尋找新的對蝦病害防控、良種選育的策略提供思路，促進我國對蝦養殖業的健康、持續發展。

為了解決上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種凡納濱對蝦血藍蛋白抗菌肽，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。

作為實施例的優選方式，所述抗菌肽的分子量為1837Da。

一種凡納濱對蝦血藍蛋白抗菌肽的應用，在制備治療或預防細菌的藥物中的應用。

作為實施例的優選方式，所述細菌包括河弧菌、溶藻酸弧菌、大腸桿菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌、乙型鏈球菌和金黃色葡萄球菌。

本發明以凡納濱對蝦血藍蛋白為研究對象，通過圓二色譜對11種凡納濱對蝦血藍蛋白抗菌肽進行結構測定，選擇具有空間結構的一種肽段B2進行深入研究。先通過抑菌試驗驗證其抑菌活性，再利用核磁共振的方法獲得血藍蛋白抗菌肽B2的核磁圖譜，利用MestReNova軟件將圖譜進行解析，從而驗證抗菌肽B2的結構。實驗結果表明，抗菌肽B2肽段具有α-螺旋和β-轉角結構，這兩種結構的存在可能對其抑菌活性具有影響。本發明為進一步研究凡納濱對蝦的免疫防御機制提供了基礎。

附圖說明

圖1為本發明的B2肽段3D模型；

圖2為本發明的B2肽段3D模型；

圖3為本發明的B2的化學結構；

圖4為本發明的B2肽段核磁共振譜-HMBC譜；

圖5為本發明的B2肽段核磁共振譜-NOESY譜上標記點①；

圖6為本發明的B2肽段核磁共振譜-NOESY譜標記點②；

圖7為本發明的B2肽段可能的空間結構。

具體實施方式

實施例1凡納濱對蝦血藍蛋白抗菌肽的預測

首先運用AntiBP Server、CAMP、APD2三個在線預測軟件，預測凡納濱對蝦血藍蛋白大、小亞基抗菌肽段，如表1、表2所示，總共預測得到34條可能具有抗菌活性的小分子片段，其中11條多肽序列(黑體加粗表示)可能會形成α螺旋結構，且能與病原菌膜相互作用而發揮抑菌作用，這些預測多肽分子量大小范圍為1.5～1.9kDa。另外，預測結果顯示，在血藍蛋白N端的α螺旋域、C端的Ig-like域以及中間部分的保守銅離子結合域均有活性片段，其中銅離子結合域和Ig-like域占主要區域。

表1凡納濱對蝦血藍蛋白大亞基抗菌肽段的預測