[發明專利]一種雜交狼尾草的異源多倍體誘導生產方法

有效

• 申請號: 201710534194.7
• 申請日: 2017-07-03
• 公開（公告）號: CN107155875B
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 黃麗芳;孫鏖;夏新界;鄧薈芬;易康樂
• 申請（專利權）人: 中國科學院亞熱帶農業生態研究所;湖南省畜牧獸醫研究所
• 主分類號: A01H1/08
• 分類號: A01H1/08;A01H4/00
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

1.一種雜交狼尾草的多倍體誘導生長方法，所述方法包括：

(1)浸泡處理：將異源三倍體雜交狼尾草一代種子消毒后，在4℃下浸泡于誘變劑中，浸泡處理30-90min，所述誘變劑是含有1.0-3.0mg/L的秋水仙堿和1.5-2.0mg/L的二甲基亞砜的已滅菌的混合液；

(2)初代培養：將步驟(1)中浸泡處理后的種子取出，放置在無菌濾紙上晾干，然后直接接種到包含0.5-3.0mg/L秋水仙堿的初代培養基上，在20-30℃，1000lx光照強度下，每天光照10h，光照培養25-35天，獲得植株，所述初代培養基為包含N6+6-BA3.0-5.0mg/L+矮壯素3.0-5.0mg/L的瓊脂固體培養基；

(3)多倍體鑒定：選擇步驟(2)培養獲得的植株中表型變異明顯的植株，在生根培養基中培養生根，然后取根尖包含有分生區部位的部分，進行染色體核型鑒定；染色體數目以染色體組為單位成倍增加的即為多倍體，所述生根培養基為包含1/2MS+多效唑0.5-3.0mg/L的瓊脂固體培養基；

(4)增殖培養：將步驟(3)中鑒定為多倍體的植株接種到增殖培養基上增殖培養6個月，獲得瓶苗，所述增殖培養基為包含1/2MS+6-BA1.0-2.5mg/L+多效唑3.0-5.0mg/L的瓊脂固體培養基；

(5)生產：將步驟(4)獲得的瓶苗，接種到一次性成苗培養基中進行培養，在獲得大量叢芽的同時，根部也形成大量健壯的根系，獲得增殖生根苗，所述一次性成苗培養基為包含1/2MS+6-BA1.0-2.5mg/L+多效唑3.0-5.0mg/L的瓊脂固體培養基；

(6)移栽：將步驟(5)獲得的增殖生根苗，置于自然光下煉苗3-5天；然后取出，清洗根系上的培養基，選擇陰天或傍晚時分直接移栽至大田。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，在4℃下浸泡于誘變劑中，浸泡處理60min。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述初代培養基包含1.5mg/L秋水仙堿。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，在25℃，1000lx光照強度下，每天光照10h，光照培養30天，獲得植株。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述誘變劑中包含1.5mg/L的秋水仙堿和1.5mg/L的二甲基亞砜。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述種子消毒的具體步驟為：首先將所述種子放在無菌操作臺上用無菌水洗5-7次，再用70％酒精浸潤30秒-1分鐘，然后放入0.1％的二氯化汞溶液中滅菌12-18分鐘，再用無菌水沖洗5-6次。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述初代培養基為包含N6+6-BA5.0mg/L+矮壯素5.0mg/L或N6+6-BA4.0mg/L+矮壯素5.0mg/L的瓊脂固體培養基。

8.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述生根培養基為包含1/2MS+多效唑1.0mg/L或1/2MS+多效唑1.5mg/L的瓊脂固體培養基。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，所述增殖培養基為包含1/2MS+6-BA1.0mg/L+多效唑5.0mg/L或1/2MS+6-BA2.0mg/L+多效唑5.0mg/L的瓊脂固體培養基。