[發明專利]一種肺癌細胞系及其應用

在審

• 申請號: 201710533724.6
• 申請日: 2017-07-03
• 公開（公告）號: CN107312752A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 蘇丹;范云;毛偉敏;應莉莎
• 申請（專利權）人: 浙江省腫瘤醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02;A01K67/027;C12R1/91
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發明涉及生物學和腫瘤學技術領域，特別是涉及一種肺癌細胞系及其應用。

背景技術

目前，肺癌是世界上發病率和死亡率最高的腫瘤，而非小細胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的約85％。根據中國的癌癥數據預測，在2015年將會有73.33萬新發肺癌病例，會有61.02萬人死于肺癌，因此，肺癌已經成為威脅群眾健康的重要因素。

肺癌的臨床表現比較復雜，癥狀和體征的有無、輕重以及出現的早晚，取決于腫瘤發生部位、病理類型、有無轉移及有無并發癥，以及患者的反應程度和耐受性的差異。肺癌早期癥狀常較輕微，甚至可無任何不適。中央型肺癌癥狀出現早且重，周圍型肺癌癥狀出現晚且較輕，甚至無癥狀，常在體檢時被發現。早期非小細胞肺癌(I、II期)主要經手術，約25％的手術病例接受化療和/或放射治療，大多數III期和IV期的NSCLC患者一般會接受化療、放射治療。目前，早期肺癌的5年生存率可達到55％，但晚期肺癌的5年生存率卻只有4％。由于早期肺癌并未出現臨床癥狀，大多數肺癌(57％)確診時已存在遠處轉移。

隨著一些關于肺癌分子生物學研究的開展，一些癌基因和抑癌基因在腫瘤的發生發展中起著非常重要的作用，這些發現從根本上改變了非小細胞肺癌患者的治療方案。因此，靶向治療藥物，如血管生成抑制劑，表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑和間變性淋巴瘤激酶(ALK)抑制劑也成為了NSCLC治療的重要部分。此外，免疫治療通過靶向程序性細胞死亡作用的藥物受體在T細胞上已被批準用于治療某些類型的NSCLC。

為深入了解非小細胞肺癌的發病機理及靶向治療和化療的抗癌藥物研究，必須建立合適的研究模型。然而，目前已經建立的NSCLC患者細胞系大多都來源于西方國家，但一些流行病學、分子研究和臨床表現發現黃種人和白種人在非小細胞肺癌的各個方面存在相當大的差異，包括不吸煙的女性比例，EGFR突變情況與酪氨酸激酶抑制劑(TKI)藥物臨床反應等。而且，隨著腫瘤精準醫學的治療理念的深入臨床實踐，提供更多的肺癌細胞株有助于靶向藥物的研發和應用。建立中國人來源的肺癌細胞株，為肺癌的發病機制及治療提供新的模型，具有重要的理論和實際應用價值。

發明內容

本發明針對目前國內缺乏中國人來源的肺癌細胞株，而提供了一種來源于中國人的肺癌細胞系。

本發明人肺癌細胞系ZLC-001從一例肺癌患者(患者為44歲中國女性，腫瘤位于右肺中、下葉，胸腔鏡胸壁內膜活檢病理提示(右側壁胸膜)腺癌，臨床分期4期。)的胸水，離心后取腫瘤細胞，經原代培養并建系成功后，命名為人肺癌細胞系ZLC-001，于2017年5月31日保藏于位于中國武漢武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏號為：CCTCC NO：C201754。

本發明人肺癌細胞系ZLC-001細胞在倒置光學相差顯微鏡下觀察呈扁平不規則多角形，細胞體積大，核大，胞漿豐富，細胞間連接緊密，貼壁生長，符合腺上皮樣細胞的特點。貼壁后生長較快，具有良好的體外培養擴增性。染色體數目大多分布在60～69之間，眾數為61，符合惡性腫瘤的特征。

本發明人肺癌細胞系ZLC-001的STR測序結果與ATCC、DSMZ等細胞保存庫的數據庫進行查詢對比，未發現相同STR檢測結果，證明其是唯一的，且在原代培養過程中未發生和其他細胞的交叉污染。免疫組化實驗發現，人肺癌細胞系ZLC-001細胞呈CK7陽性，CK5/6陰性，NSE陰性，p63陰性，TTF1陰性和Vimentin陽性。

克隆形成實驗發現，人肺癌細胞系ZLC-001細胞的克隆形成率與接種密度有關，接種密度為4500個細胞時的細胞克隆形成能力較強。

裸鼠(裸小鼠)成瘤實驗結果發現，人肺癌細胞系ZLC-001具有較強的成瘤性。

本發明又提供了所述的肺癌細胞系的子代細胞。所述子代細胞基本或全部保留了親代細胞的特性。

本發明又提供了所述的肺癌細胞系在作為肺癌發生機理研究的細胞模型中的應用。由于本發明人肺癌細胞系ZLC-001是從中國人來源建立的，且建系時間較短，性狀穩定，以該肺癌細胞系作為研究模型，對于了解中國人的原發性肺癌發生機理有很大幫助。

本發明還提供了所述的肺癌細胞系在建立哺乳動物肺癌模型中的應用。所述的哺乳動物為裸小鼠或裸大鼠。通過將一定細胞數量的所述人肺癌細胞系ZLC-001細胞接種于裸小鼠或裸大鼠的皮下、肝臟、腹腔或者尾靜脈等部位，獲得肺癌的動物模型。