[發(fā)明專利]一種基于ZmMIKC2a基因調(diào)節(jié)玉米籽粒淀粉含量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710533351.2
• 申請日: 2017-07-03
• 公開（公告）號: CN107254475B
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 董慶;李廷春;王俊;王芳;張瑋;陳洪儉;李成
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;A01H5/10;A01H6/46
• 代理公司: 合肥中谷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 34146
• 代理人: 曾弦

1.一種基于ZmMIKC2a基因調(diào)節(jié)玉米籽粒淀粉含量的方法，其特征在于，包括：

I）構(gòu)建ZmMIKC2a基因過量表達(dá)載體，將過量表達(dá)載體導(dǎo)入目的玉米，得到ZmMIKC2a基因過量表達(dá)植株；或者：

II）將目的玉米中的ZmMIKC2a基因敲除，獲得ZmMIKC2a基因缺失植株；

所述ZmMIKC2a基因過量表達(dá)植株的籽粒直鏈淀粉含量和直鏈淀粉/總淀粉比例高于目的玉米，所述ZmMIKC2a基因缺失植株的籽粒直鏈淀粉含量和直鏈淀粉/總淀粉比例低于目的玉米；所述ZmMIKC2a基因為核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的DNA分子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于ZmMIKC2a基因調(diào)節(jié)玉米籽粒淀粉含量的方法，其特征在于，所述ZmMIKC2a基因的獲得方法為：提取玉米籽粒胚乳或玉米花絲RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA為模板，以MIKC2a-F、MIKC2a-R為引物進(jìn)行PCR克隆；其中，MIKC2a-F、MIKC2a-R引物序列為：

MIKC2a-F：5′- ATGGGTAGGGGAAGGATTGA -3′

MIKC2a-R：5′- TTAGAACTGATGATGAGGGTTATTG -3′。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于ZmMIKC2a基因調(diào)節(jié)玉米籽粒淀粉含量的方法，其特征在于，所述ZmMIKC2a基因過量表達(dá)載體為多克隆位點區(qū)域依次連接有35S啟動子、ZmMIKC2a基因和終止子的pZZ00005植物表達(dá)載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于ZmMIKC2a基因調(diào)節(jié)玉米籽粒淀粉含量的方法，其特征在于，所述將目的玉米中的ZmMIKC2a基因敲除方法為基因工程法。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種基于ZmMIKC2a基因調(diào)節(jié)玉米籽粒淀粉含量的方法，其特征在于，采用RNAi技術(shù)將目的玉米中的ZmMIKC2a基因敲除，包括以下步驟：

a）根據(jù)ZmMIKC2a基因序列確定ZmMIKC2a基因的特異性RNAi干涉序列，所述RNAi干涉序列為部分ZmMIKC2a基因序列；

b）根據(jù)ZmMIKC2a基因序列設(shè)計引物，PCR擴(kuò)增ZmMIKC2a基因的RNAi干涉序列；

c）構(gòu)建RNAi干涉表達(dá)載體，所述RNAi干涉表達(dá)載體包括依次連接的胚乳特異性啟動子、正反向ZmMIKC2a基因的RNAi干涉序列和終止子；所述正反向ZmMIKC2a基因的RNAi干涉序列為正向-反向連接的ZmMIKC2a基因RNAi干涉序列或反向-正向連接的ZmMIKC2a基因RNAi干涉序列；

d）將RNAi干涉表達(dá)載體導(dǎo)入目的玉米的基因組中，篩選獲得ZmMIKC2a基因缺失植株。