[發明專利]一種京尼平交聯脫細胞神經支架及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201710533124.X
• 申請日: 2017-07-03
• 公開（公告）號: CN107158466A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 喬文蘭;郭涇;盧璐
• 申請（專利權）人: 山東大學齊魯醫院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司37221
• 代理人: 王志坤

技術領域

本發明涉及神經支架材料技術領域，具體涉及一種京尼平交聯脫細胞神經支架及其制備方法與應用。

背景技術

周圍神經損傷是臨床常見的疾病，其對應的肢體運動，感覺功能完全喪失，肌肉萎縮給患者帶來極大痛苦并造成社會負擔。目前周圍神經損傷的修復方法大多采用顯微外科技術，即神經縫合術、自體神經移植術、神經植入術等。但是神經縫合及植入往往引起神經黏連和瘢痕形成，并且植入成功修復神經損傷的成功率較低，是神經外科學亟待解決的難題。

大量研究發現，在神經損傷修復中，在吻合處使用生物膜包繞，阻隔外部環境的影響，減少炎性細胞浸潤可有效防止黏連和瘢痕形成，并充分發揮遠端神經的趨化作用(Mackinnon,S.E.and A.R.Hudson,Clinical application of peripheral nerve transplantation.Plast Reconstr Surg,1992.90(4):p.695-9.)。而與使用其他可降解生物材料相比，去細胞神經支架材料在修復神經缺損時表現出更好的生物相容性和生物力學性能，并且更易引導神經再生。

由于自身神經來源受限且異體異種神經具有免疫原性，因此，神經支架材料應去除神經細胞成分并最大程度保留細胞外基質成分(Wang,Q.,et al.,The preparation and comparison of decellularized nerve scaffold of tissue engineering.J Biomed Mater Res A,2014.102(12):p.4301-8.)。目前證明對異種動物組織采用去細胞技術處理可獲得無免疫原性神經支架。現在常用的神經去細胞方法包括化學法和物理法。但是物理法去細胞不徹底，化學法所用化學物質難以完全去除，殘留對神經細胞附著再生有影響，因此，急需尋找新的方法改進神經支架的去細胞效果。

本申請人課題組在前期研究中利用一種新型的深海細菌酶——Myroilysin處理Wistar大鼠坐骨神經，獲得了脫細胞神經支架。Myroilysin酶具有特異性，除溶解彈力蛋白和膨脹膠原外，不會破壞神經組織中的其他結構與成分，與天然神經細胞外基質非常相似。組織學觀察發現，Myroilysin脫細胞神經支架具有徹底的脫細胞效果，所保留的神經基底膜結構均勻一致。但在后續的研究中發現，Myroilysin酶對其儲存的條件要高，而且在儲存過程中酶的生物效價會發生變化，導致在制備脫細胞神經支架時需要對酶的加入量和處理時間等制備條件進行重新摸索。若制備條件選擇不當，則會導致制備的脫細胞神經支架的強度降低，進而影響脫細胞神經支架材料的機械性能，使其難以滿足植入部位的力學要求。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提供一種京尼平交聯脫細胞神經支架及其制備方法。

本發明的另一目的是提供上述京尼平交聯脫細胞神經支架在作為周圍神經損傷修復材料中的用途。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面，提供一種京尼平交聯脫細胞神經支架的制備方法，步驟如下：

將離體動物神經組織用Tris-HCl溶液沖洗；將沖洗后的離體動物神經組織浸入Myroilysin溶液進行孵育；孵育后加入含有京尼平的Tris-HCl溶液進行交聯；交聯后再用Tris-HCl溶液沖洗，即制備得到京尼平交聯脫細胞神經支架。

上述制備方法中，沖洗用的Tris-HCl溶液的濃度為50mM，pH9.0。

上述制備方法中，所述Myroilysin溶液的濃度為0.2-0.8mg/ml；優選為0.4mg/ml。

上述制備方法中，孵育的溫度為37℃，孵育的時間為12-48h；優選的，孵育的時間為24h。

上述制備方法中，含有京尼平的Tris-HCl溶液中京尼平的濃度為0.2-0.3mg/ml；優選為0.25mg/ml。

上述制備方法中，含有京尼平的Tris-HCl溶液中，Tris-HCl溶液的濃度為50mM，pH7.2。

上述制備方法中，交聯的溫度為37℃，交聯的時間為12h。

本發明的第二方面，提供上述制備方法制備得到的京尼平交聯脫細胞神經支架。