[發明專利]一種快速高效固定化光合細菌的方法

有效

• 申請號: 201710531183.3
• 申請日: 2017-07-03
• 公開（公告）號: CN109207468B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 張國亮;張旭;秦磊;孟琴;劉秋花;范錚
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12R1/01
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.一種光合細菌固定化方法，其特征在于光合細菌固定化方法為：

（1）將光合細菌在光合細菌液體培養基中光照厭氧條件下培養至對數生長期，固液分離棄去上清液，收集光合細菌菌體，再將菌體重新懸浮于無菌生理鹽水，配得光合細菌細胞懸液；

（2）按照1:20~80的體積比將氫氧化鐵膠體或氫氧化鋁膠體加入到步驟（1）所得光合細菌細胞懸液中，調節pH值7~8，置于培養箱中在光強為1000lux~2000lux的條件下光照厭氧培養2~6天，培養溫度為25~34℃培養，即獲得固定化光合細菌;

所述氫氧化鐵膠體按以下方法制備：取20~40mL 90℃去離子水至 200mL 容量的燒杯中，蓋上表面皿置于磁力攪拌器上加熱，待到水沸騰以后，打開磁力攪拌器中速攪拌，向沸騰的蒸餾水中逐滴加1~3mL飽和FeCl₃溶液，控制滴加速度在 4~5分鐘內滴完，滴加完畢后停止攪拌，繼續加熱沸騰 1~3分鐘，此后，將膠體冷卻至60℃~70℃，并陳化一定時間使膠核長大；

所述氫氧化鋁膠體按以下方法制備：將50mg氫氧化鋁與50mL 0.1mol/L的稀鹽酸混合，調節pH=3.6，80℃下恒溫水浴下，回流反應12h，即可制得透明的氫氧化鋁膠體。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述光合細菌液體培養基終濃度組成為：酵母膏0.5 g/Ｌ、蛋白胨0.5 g/Ｌ、CH₃COONa 3 g/Ｌ、NH₄Cl 0.1 g/Ｌ、NaCl 0.5 g/Ｌ、NaHCO₃ 0.5 g/Ｌ、K₂HPO₄ 0.2 g/Ｌ、MgSO₄·7H₂O 0.1 g/Ｌ、CaCl₂ 0.1 g/Ｌ溶劑為水，初始pH 7~8。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述光合細菌為紅假單胞菌屬(Rhodopseudomonas)光合細菌。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述氫氧化鐵膠體為經過純化后的氫氧化鐵膠體。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于：所述純化為將氫氧化鐵膠體置于孔徑為0.1~0.45μm的半透膜中進行純化，取未能透過半透膜的液體。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于所述半透膜的制備方法為：取10~20mL火棉膠，倒入150mL干燥潔凈的錐形瓶中，小心轉動錐形瓶，使瓶內壁可以均勻鋪展一層液膜，傾出多余的棉膠液，將錐形瓶倒置于鐵圈上，待溶劑揮發完；同法涂上第2層、第3層、第4層，得1層、2層、3層和4層膜；將瓶口的薄膜脫開，在膜與容器壁之間注入水，使膜自動脫離瓶壁，即得所述半透膜，置于蒸餾水中待用。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）所述固液分離通過10000~12000r/min的轉速下離心實現。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）所述光合細菌細胞懸液的濃度為每毫升生理鹽水含有光合細菌細胞250~350個。