[發明專利]一種MCF?7乳腺癌細胞的凍存方法

在審

• 申請號: 201710525650.1
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107183011A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 朱智杰
• 申請（專利權）人: 蘇州誠晟信息技術有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 蘇州市方略專利代理事務所(普通合伙)32267
• 代理人: 馬廣旭

1.一種MCF-7乳腺癌細胞的凍存方法，其特征在于：包括以下步驟：用移液槍將培養基吸盡，加入3-5ml PBS洗滌MCF-7乳腺癌細胞2-3次，向細胞培養皿中加入1-2ml 0.38%的胰蛋白酶，于37℃條件下消化3-5min，加入2-3ml的新鮮的MCF-7乳腺癌細胞專用培養基，使用移液槍吹打細胞培養皿底部40-50次；將液體移至細胞離心管中，在1000-1500g/min條件下離心3-10min，用移液槍去除上清液，加入MCF-7乳腺癌細胞專用凍存液，使用移液槍上下吹打MCF-7乳腺癌細胞40-50次，加入到細胞凍存管中，擰緊凍存管蓋，用封口膜封住凍存管；在2-7℃保存10-30min，再于-15 - -20℃保存40-60min，然后移入到≤-80℃環境進行細胞凍存；其中所述MCF-7乳腺癌細胞專用凍存液以重量組分計，包括以下組分：二甲基亞砜5-15份、羥甲基淀粉2-5份、山梨糖3-12份、維生素C1-4份、50%高滲葡萄糖0.8-3份、丙二醇1-1.5份、(S)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺?；?2-甲基-1,4-二氮環庚烷0.3-3份和基礎培養基80-90份。

2.根據權利要求1所述的MCF-7乳腺癌細胞的凍存方法，其特征在于：凍存的MCF-7乳腺癌細胞在≤-80℃環境過夜凍存后，第二天放入液氮罐中在液氮浸沒于液氮中進行細胞凍存。

3.根據權利要求1所述的MCF-7乳腺癌細胞的凍存方法，其特征在于：每支凍存管中MCF-7乳腺癌細胞凍存密度為10⁵-10⁶個細胞。

4.根據權利要求1所述的MCF-7乳腺癌細胞的凍存方法，其特征在于：所述胰蛋白酶中還包含0.5%的EDTA。

5.根據權利要求1所述的MCF-7乳腺癌細胞的凍存方法，其特征在于：所述MCF-7乳腺癌細胞專用培養基包括70-90%的基礎培養基以及10-30%的胎牛血清。

6.根據權利要求1或5所述的MCF-7乳腺癌細胞的凍存方法，其特征在于：所述基礎培養基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖 82-88份、碳酸氫鈉 12-25份、丙酮酸鈉10-16份、轉鐵蛋白3-8份、氯化鉀35-45份、無水硫酸鎂 6-10份、氯化鈉70-78份、氯化鋰5-8份、無水磷酸二氫鈉10-14份、葉酸 0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、煙酰胺0.3-0.6份、無水氯化鈣25-35份、硝酸鐵0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸鈉12-16份、D-泛酸鈣 0.3-0.6份、酒石酸膽堿0.6-0.8份、核黃素0.1-0.3份、鹽酸硫胺0.2-0.4份、鹽酸吡哆辛 0.3-0.5份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.3-0.6份、亞麻油1-1.5份、聚脂肪酸酯0.8-1.6份、酚紅鈉1-1.3份和去離子水100份。

7.根據權利要求6所述的MCF-7乳腺癌細胞的凍存方法，其特征在于：所述基礎培養基還包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計，由以下組分組成：L-鹽酸精氨酸 5-10份、L-鹽酸胱氨酸 3-8份、L-絲氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-鹽酸組氨酸 4-6份、L-異亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-鹽酸賴氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-蘇氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-纈氨酸8-12份。

8.根據權利要求7所述的MCF-7乳腺癌細胞的凍存方法，其特征在于：所述基礎培養基還包括2-5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子3-8份、白介素6 2-5份、白介素10 1-4份、白介素12 3-6份、TNF-β2-10份、GM-CSF1-5份。

9.根據權利要求8所述的MCF-7乳腺癌細胞的凍存方法，其特征在于：所述基礎培養基以重量組分計，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素。

10.根據權利要求9所述的MCF-7乳腺癌細胞的凍存方法，其特征在于：所述青霉素選自10000U/ml，所述鏈霉素選自10000μg/ml。