[發明專利]一種低成本的病毒體外三維培養模型的建立方法在審

申請號：	201710524962.0	申請日：	2017-06-30
公開（公告）號：	CN107164301A	公開（公告）日：	2017-09-15
發明（設計）人：	朱智杰	申請（專利權）人：	蘇州誠晟信息技術有限公司
主分類號：	C12N5/02	分類號：	C12N5/02
代理公司：	蘇州市方略專利代理事務所(普通合伙)32267	代理人：	馬廣旭
地址：	215400 江蘇省***	國省代碼：	江蘇;32
權利要求書：	查看更多	說明書：	查看更多
摘要：
搜索關鍵詞：	一種低成本病毒體外三維培養模型建立方法
鉆瓜網技術展會專利詞庫專利權人專利榜在售專利公布日期熱門專利

【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種病毒培養用的體外模型，具體地，涉及一種低成本的病毒體外三維培養模型的建立方法。

背景技術

在病毒學的發展史中，常利用易感動物如家兔、小白鼠、豚鼠等對目的病毒進行實驗。動物模型可以觀察病毒對機體的侵害，造成病理變化的部位，但動物個體差異大，價格昂貴，還需要特殊的動物房，因此推廣起來成本巨大。隨著科學的發展，也出現了很多體外培養病毒的模型，但常規的細胞培養技術模型往往并不能反應病毒在體內的致病過程。

發明內容

發明目的：為了克服以上不足，本發明提供了一種低成本的病毒體外三維培養模型的建立方法，運用三維培養技術，既能避免動物體內實驗帶來的高成本，又能最大程度的模擬動物體內生長模式，使所培養的細胞呈現立體生長方式，形成類似體內的組織結構，進而有助于模擬病毒體內的致病過程，該模型方法簡便，成本低廉，推廣方便。

技術方案：為了克服現有技術中存在的不足，本發明提供了一種低成本的病毒體外三維培養模型的建立方法，包括以下操作步驟：

（1）微載體混懸液的準備：稱取1-3份的微載體，置于玻璃容器內，按照微載體1份：50ml磷酸鹽緩沖液的比例加入磷酸鹽緩沖液，混勻1-3h，然后再用新鮮的清洗液洗滌2-3次，再按照微載體1份：50ml磷酸鹽緩沖液的比例加入新鮮的磷酸鹽緩沖液，高壓滅菌，冷卻后4℃保存；

（2）細胞貼壁阻滯劑制備：按照2.5%的濃度制備，稱取細胞貼壁阻滯劑粉末，加入無水乙醇，密封后混勻10-30分鐘，4℃保存；

（3）準備6孔板，將制備好的細胞貼壁阻滯劑均勻鋪在6孔板里，靜置風干，再將制備好的細胞以10⁵/ml的濃度接種于6孔板中，所述細胞的培養基包括70-90%的基礎培養基以及10-30%的胎牛血清，所述基礎培養基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖 80-90份、碳酸氫鈉 10-20份、丙酮酸鈉8-18份、轉鐵蛋白2-10份、氯化鉀 30-50份、無水硫酸鎂 5-12份、氯化鈉60-80份、氯化鋰3-10份、無水磷酸二氫鈉 8-16份、葉酸 0.2-0.6份、肌醇0.5-1.5份、煙酰胺0.2-0.8份、無水氯化鈣20-40份、硝酸鐵0.1-0.5份、丁二酸 5-10份、丁二酸鈉9-18份、D-泛酸鈣 0.2-0.8份、酒石酸膽堿0.5-1份、核黃素0.1-0.3份、鹽酸硫胺0.1-0.5份、鹽酸吡哆辛 0.1-0.6份、4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸0.2-0.8份、亞麻油0.5-2份、聚脂肪酸酯0.5-1.8份、酚紅鈉0.8-1.5份和去離子水100份；再加入制備好的微載體混懸液，細胞液與微載體混懸液比例為4:1，混勻后，放置于細胞培養箱內，3-4天等細胞三維結構成型后，即可進行病毒接種實驗。

該模型的建立既能避免動物體內實驗帶來的高成本，又能最大程度的模擬動物體內生長模式，使所培養的細胞呈現立體生長方式，形成類似體內的組織結構，進而有助于模擬病毒體內的致病過程，該模型方法簡便，成本低廉，推廣方便。

進一步的，上述的一種低成本的病毒體外三維培養模型的建立方法，其所述微載體為Cytodex3。與Cytodex1/2相比，該種微載體實用性更廣，適合更多類型的細胞接種，便于多種疾病模型的建立。

進一步的，上述的一種低成本的病毒體外三維培養模型的建立方法，其所述細胞貼壁阻滯劑為poly-hema。該阻滯劑可以有效的阻止細胞貼附在培養板底部，進而促進三維培養模型的順利建立。

進一步的，上述的一種低成本的病毒體外三維培養模型的建立方法，其所述高壓滅菌時的溫度為120℃-140℃，滅菌時間30-50分鐘。

進一步的，上述的一種低成本的病毒體外三維培養模型的建立方法，所述清洗液包括如下組份：按重量組份計，

氯化鈉：50-80份

氯化鉀：2-5份

磷酸氫二鈉：10-15份

磷酸二氫鉀：1-5份

氯化鎂：8-10份

葡萄糖：5-10份

去離子水：40-50份。