[發(fā)明專(zhuān)利]一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710524840.1
• 申請(qǐng)日: 2017-06-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107164299A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李瑞清
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 太倉(cāng)卡斯特姆新材料有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/00
• 代理公司: 蘇州市方略專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙)32267
• 代理人: 馬廣旭

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種病毒培養(yǎng)用的體外模型，具體地，涉及一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法。

背景技術(shù)

在病毒學(xué)的發(fā)展史中，常利用易感動(dòng)物如家兔、小白鼠、豚鼠等對(duì)目的病毒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物模型可以觀察病毒對(duì)機(jī)體的侵害，造成病理變化的部位，但動(dòng)物個(gè)體差異大，價(jià)格昂貴，還需要特殊的動(dòng)物房，因此推廣起來(lái)成本巨大。隨著科學(xué)的發(fā)展，也出現(xiàn)了很多體外培養(yǎng)病毒的模型，但常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)模型往往并不能反應(yīng)病毒在體內(nèi)的致病過(guò)程。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：為了克服以上不足，本發(fā)明提供了一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法，運(yùn)用三維培養(yǎng)技術(shù)，既能避免動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的高成本，又能最大程度的模擬動(dòng)物體內(nèi)生長(zhǎng)模式，使所培養(yǎng)的細(xì)胞呈現(xiàn)立體生長(zhǎng)方式，形成類(lèi)似體內(nèi)的組織結(jié)構(gòu)，進(jìn)而有助于模擬病毒體內(nèi)的致病過(guò)程，該模型方法簡(jiǎn)便，成本低廉，推廣方便。

技術(shù)方案：為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供了一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法，包括以下操作步驟：

（1）微載體混懸液的準(zhǔn)備：稱取1-3份的微載體，置于玻璃容器內(nèi)，按照微載體1份：50ml磷酸鹽緩沖液的比例加入磷酸鹽緩沖液，混勻1-3h，然后再用新鮮的清洗液洗滌2-3次，再按照微載體1份：50ml磷酸鹽緩沖液的比例加入新鮮的磷酸鹽緩沖液，高壓滅菌，冷卻后4℃保存；

（2）細(xì)胞貼壁阻滯劑制備：按照2.5%的濃度制備，稱取細(xì)胞貼壁阻滯劑粉末，加入無(wú)水乙醇，密封后混勻10-30分鐘，4℃保存；

（3）準(zhǔn)備6孔板，將制備好的細(xì)胞貼壁阻滯劑均勻鋪在6孔板里，靜置風(fēng)干，再將制備好的細(xì)胞以10⁵/ml的濃度接種于6孔板中，再加入制備好的微載體混懸液，細(xì)胞液與微載體混懸液比例為4:1，混勻后，放置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，3-4天等細(xì)胞三維結(jié)構(gòu)成型后，即可進(jìn)行病毒接種實(shí)驗(yàn)。

該模型的建立既能避免動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的高成本，又能最大程度的模擬動(dòng)物體內(nèi)生長(zhǎng)模式，使所培養(yǎng)的細(xì)胞呈現(xiàn)立體生長(zhǎng)方式，形成類(lèi)似體內(nèi)的組織結(jié)構(gòu)，進(jìn)而有助于模擬病毒體內(nèi)的致病過(guò)程，該模型方法簡(jiǎn)便，成本低廉，推廣方便。

進(jìn)一步的，上述的一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法，其所述微載體為Cytodex3。與Cytodex1/2相比，該種微載體實(shí)用性更廣，適合更多類(lèi)型的細(xì)胞接種，便于多種疾病模型的建立。

進(jìn)一步的，上述的一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法，其所述細(xì)胞貼壁阻滯劑為poly-hema。該阻滯劑可以有效的阻止細(xì)胞貼附在培養(yǎng)板底部，進(jìn)而促進(jìn)三維培養(yǎng)模型的順利建立。

進(jìn)一步的，上述的一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法，其所述高壓滅菌時(shí)的溫度為120℃-140℃，滅菌時(shí)間30-50分鐘。

進(jìn)一步的，上述的一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法，所述清洗液包括如下組份：按重量組份計(jì)，

氯化鈉：50-80份

氯化鉀：2-5份

磷酸氫二鈉：10-15份

磷酸二氫鉀：1-5份

氯化鎂：8-10份

葡萄糖：5-10份

去離子水：40-50份。

進(jìn)一步的，上述的一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法，其所述磷酸鹽緩沖液的制備方法包括如下步驟，

（1）精確稱取氯化鈉80g，氯化鉀2g，磷酸氫二鈉13.96g，磷酸二氫鉀2g，放入同一玻璃容器中；

（2）向上述玻璃容器中加去離子水至800ml，攪拌30分鐘使鹽溶解；

（3）再定容至1000ml，得到10X的磷酸鹽緩沖液，臨用時(shí)稀釋10倍，調(diào)整pH=7.3。

進(jìn)一步的，上述的一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法，其所述的玻璃容器，為清潔干凈并滅菌后的帶蓋玻璃瓶。

各種配方組成組分合理，操作步驟簡(jiǎn)便易行，并且生產(chǎn)成本低，適合推廣。

有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明所述的一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法既能避免動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的高成本，又能最大程度的模擬動(dòng)物體內(nèi)生長(zhǎng)模式，使所培養(yǎng)的細(xì)胞呈現(xiàn)立體生長(zhǎng)方式，形成類(lèi)似體內(nèi)的組織結(jié)構(gòu)，進(jìn)而有助于模擬病毒體內(nèi)的致病過(guò)程，該模型方法簡(jiǎn)便，成本低廉，推廣方便。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明所述的一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法示意圖。

具體實(shí)施方式

下面將通過(guò)幾個(gè)具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，這些實(shí)施例只是為了說(shuō)明問(wèn)題，并不是一種限制。

實(shí)施例1

本發(fā)明提供了一種病毒體外三維培養(yǎng)模型的建立方法，包括以下操作步驟：