[發(fā)明專利]一種Vero細(xì)胞凍存液

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710524527.8
• 申請(qǐng)日: 2017-06-30
• 公開（公告）號(hào): CN107306938A
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬榮華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州北開生化設(shè)備有限公司
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 蘇州市方略專利代理事務(wù)所(普通合伙)32267
• 代理人: 馬廣旭

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，具體地，涉及一種Vero細(xì)胞凍存液。

背景技術(shù)

細(xì)胞培養(yǎng)是生物與健康相關(guān)研究領(lǐng)域的一項(xiàng)重要技術(shù)。隨著生命科學(xué)的迅速發(fā)展，目前細(xì)胞培養(yǎng)已成為細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)和免疫學(xué)等學(xué)科研究的重要基礎(chǔ)。為了深入探討細(xì)胞的生長(zhǎng)活動(dòng)規(guī)律、有關(guān)疾病的病理和藥物的藥理（毒理）機(jī)制，開發(fā)具有不同針對(duì)性的細(xì)胞培養(yǎng)方法具有重要意義。

Vero細(xì)胞是日本學(xué)者1962年從非洲綠猴(cercopithecus aethiops monkey)腎建立的猴腎細(xì)胞系。其名稱的由來是取自世界語(yǔ)中“綠”字的VERDE前兩個(gè)字母和“腎”字前兩個(gè)字母合在一起，但世界語(yǔ)中不允許VERE存在，而需以“O”結(jié)尾，故命名為“Vero”。其第93代被帶到美國(guó)NIH的過敏與傳染病研究所熱帶病毒研究室，第113代被提交給ATCC，編號(hào)為ATCC NO.CCL-81。

除了常規(guī)的科研需要之外，經(jīng)過全面的研究鑒定，Vero細(xì)胞具有胞核學(xué)穩(wěn)定，沒有外源因子污染和致瘤性的優(yōu)點(diǎn)，完全符合1987年WHO關(guān)于用于生物制品的傳代細(xì)胞的規(guī)程要求，并已被WHO批準(zhǔn)可用作疫苗生產(chǎn)的基質(zhì)。于是，Vero細(xì)胞小兒麻痹滅活疫苗、小兒麻痹活疫苗、Vero細(xì)胞狂犬病疫苗相繼在法國(guó)被研制出來并獲批準(zhǔn)生產(chǎn)。因此，Vero細(xì)胞的應(yīng)用前景以及需求量極大。隨著研究過程中越來越多的運(yùn)用組織細(xì)胞培養(yǎng)增殖技術(shù)，將Vero細(xì)胞采用低溫度進(jìn)行長(zhǎng)期保存數(shù)年、數(shù)十年甚至數(shù)百年，一旦需要，可隨時(shí)對(duì)所保存的細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇，恢復(fù)其完整的形態(tài)結(jié)構(gòu)與生物學(xué)特性，供生命科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明提供了一種Vero細(xì)胞凍存液，專用于Vero細(xì)胞的培養(yǎng)。

技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種Vero細(xì)胞凍存液，以重量組分計(jì)，包括以下組分：二甲基亞砜5-15份、羥乙基淀粉3-8份、葡萄糖5-15份、維生素E1-5份、20%甘露醇2-10份、丙二醇1-2份、(S)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷0.8-2份和基礎(chǔ)培養(yǎng)基80-90份。本發(fā)明所述的Vero細(xì)胞凍存液，組分合理，營(yíng)養(yǎng)豐富，其中，20%甘露醇為滲透性保護(hù)液，而(S)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮環(huán)庚烷則抑制細(xì)胞活動(dòng)和基因表達(dá)，維生素E的抗氧化性好，在保證休眠Vero細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)的同時(shí)還可以顯著減少對(duì)細(xì)胞的損傷，提高凍存細(xì)胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的狀態(tài)。

進(jìn)一步的，上述的Vero細(xì)胞凍存液，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基以重量組分計(jì)，包括以下組分：葡萄糖 82-88份、碳酸氫鈉 12-25份、丙酮酸鈉10-16份、人血白蛋白5-9份、氯化鉀35-45份、無(wú)水硫酸鎂 6-10份、氯化鈉70-78份、無(wú)水磷酸二氫鈉10-14份、PHA-植物血球凝集素0.4-0.8份、葉酸 0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、煙酰胺0.3-0.6份、無(wú)水氯化鈣25-35份、硝酸鐵0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸鈉12-16份、D-泛酸鈣 0.3-0.6份、酒石酸膽堿0.6-0.8份、核黃素0.1-0.3份、鹽酸硫胺0.2-0.4份、鹽酸吡哆辛 0.3-0.5份、還原谷胱甘肽 0.2-0.6份、膽固醇2-4份、抗壞血酸磷酸酯0.6-1份、聚碳酸酯0.4-0.9份、酚紅鈉1-1.3份和去離子水100份。

進(jìn)一步的，上述的Vero細(xì)胞凍存液，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計(jì)，由以下組分組成：L-鹽酸精氨酸 5-10份、L-鹽酸胱氨酸 3-8份、L-絲氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-鹽酸組氨酸 4-6份、L-異亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-鹽酸賴氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-蘇氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-纈氨酸8-12份。

進(jìn)一步的，上述的Vero細(xì)胞凍存液，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括2-5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計(jì)，由以下組分組成：重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2-10份、白介素2 3-8份、白介素4 3-6份、白介素14 1-5份、IFN-γ3-6份和神經(jīng)白細(xì)胞素1-4份。基礎(chǔ)培養(yǎng)基組分合理，營(yíng)養(yǎng)豐富，可以提高Vero細(xì)胞凍存時(shí)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，保證凍存細(xì)胞的活性。

進(jìn)一步的，上述的Vero細(xì)胞凍存液，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基還包括體積比10-30%的胎牛血清。可以根據(jù)需要，進(jìn)一步增加胎牛血清，提高凍存細(xì)胞的存活率，保持細(xì)胞活性。