[發明專利]一種MDA?MB?231乳腺癌細胞專用凍存液

在審

• 申請號: 201710524416.7
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107258768A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 曹先艷;王文峰;施亮
• 申請（專利權）人: 太倉東潯生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 蘇州市方略專利代理事務所(普通合伙)32267
• 代理人: 馬廣旭

技術領域

本發明屬于生物技術應用領域，具體地，涉及一種MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液。

背景技術

乳腺癌是女性最常見的癌癥，主要包括導管癌和小葉癌。2016年美國CA（A Cancer Journal for Clinicians）公布的最新統計數據顯示，美國2016年預計將有420840例女性患乳腺癌，占女性新發惡性腫瘤的38%，居女性惡性腫瘤發病率第一位，并且死亡人數將達52930例。更為嚴重的是全球的乳腺癌發病率正在逐年增長。

細胞培養是生物與健康相關研究領域的一項重要技術。隨著生命科學的迅速發展，目前細胞培養已成為細胞生物學、分子生物學、遺傳學和免疫學等學科研究的重要基礎。為了深入探討細胞的生長活動規律、有關疾病的病理和藥物的藥理（毒理）機制，開發具有不同針對性的細胞培養方法具有重要意義。

其中，MDA-MB-231乳腺癌細胞作為人源性高轉移乳腺癌細胞，常用于乳腺癌的體內外研究。然而，隨著研究過程中越來越多的運用組織細胞培養增殖技術，將MDA-MB-231乳腺癌細胞采用低溫度進行長期保存數年、數十年甚至數百年，一旦需要，可隨時對所保存的細胞進行復蘇，恢復其完整的形態結構與生物學特性，供生命科學研究實驗。

發明內容

發明目的：本發明提供了一種MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液。

技術方案：本發明提供了一種MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液， 以重量組分計，包括以下組分：二甲基亞砜5-15份、羥甲基淀粉2-5份、海藻糖3-12份、維生素E0.5-3份、25%山梨醇1-5份、丙二醇0.8-1.6份、(S)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮環庚烷0.5-2份和基礎培養基80-90份。本發明所述的MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液，組分合理，營養豐富，其中，25%山梨醇為滲透性保護液，而(S)-(-)-1-(4-氟異喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮環庚烷則抑制細胞活動和基因表達，維生素E的抗氧化性好，在保證休眠細胞的營養的同時還可以顯著減少對細胞的損傷，提高凍存細胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的狀態。

進一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液，所述基礎培養基以重量組分計，包括以下組分：葡萄糖 82-88份、碳酸氫鈉 12-25份、丙酮酸鈉10-16份、脂肪酸白蛋白6-12份、氯化鉀35-45份、無水硫酸鎂 6-10份、氯化鈉70-78份、無水磷酸二氫鈉10-14份、葉酸 0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、煙酰胺0.3-0.6份、無水氯化鈣25-35份、硝酸鐵0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸鈉12-16份、D-泛酸鈣 0.3-0.6份、N-異丙基甲基丙烯酰胺0.4-0.6份、酒石酸膽堿0.6-0.8份、核黃素0.1-0.3份、鹽酸硫胺0.2-0.4份、鹽酸吡哆辛 0.3-0.5份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.4-0.8份、乙酸酯1.5-2份、生物素0.6-0.8份、硫辛酸0.4-0.7份、酚紅鈉1-1.3份和去離子水100份。

進一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液，所述基礎培養基還包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量組分計，由以下組分組成：L-鹽酸精氨酸 5-10份、L-鹽酸胱氨酸 3-8份、L-絲氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-鹽酸組氨酸 4-6份、L-異亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-鹽酸賴氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-蘇氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-纈氨酸8-12份。

進一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液，所述基礎培養基還包括2-5份輔助因子，所述輔助因子以重量組分計，由以下組分組成：胰島素生長因子3-8份、白介素6 2-5份、白介素10 1-4份、白介素12 3-6份、TNF-β2-10份、GM-CSF1-5份?；A培養基組分合理，營養豐富，可以提高MDA-MB-231乳腺癌細胞凍存時的營養物質，保證凍存細胞的活性。

進一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液，所述基礎培養基還包括體積比10-30%的胎牛血清?？梢愿鶕枰?，進一步增加胎牛血清，提高凍存細胞的存活率，保持細胞活性。

進一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌細胞專用凍存液，所述基礎培養基以重量組分計，還包括0.006份青霉素和0.01份的鏈霉素?？梢杂行Х乐箖龃婕毎晃廴尽?/p>