[發明專利]一種基于磷酸氫鈣-還原石墨烯/納米金顆粒的尿酸酶生物傳感器及其制備方法

有效

• 申請號: 201710523084.0
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107462617B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 蔡玉榮;周文翠;姚菊明;馬佳慧;孫寧
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 金杭

1.一種基于磷酸氫鈣-還原石墨烯/納米金顆粒的尿酸酶生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將玻碳電極在麂皮上用0.5μm的氧化鋁拋光粉粗磨后，用超純水清洗干凈，再用0.35μm的氧化鋁拋光粉細磨，用超純水清洗干凈，置于體積比為1：3的硝酸/乙醇混合液和蒸餾水中各超聲清洗3～5min，用超純水洗凈晾干，得到預處理的玻碳電極；

2)將步驟1)中得到的預處理的玻碳電極作為工作電極，在濃度為0.5mol/L的H₂SO₄溶液中進行循環伏安掃描，掃描范圍為-1.0～1.0V，掃描速率為50mv/s，掃描段數為20段，直至循環伏安掃描曲線穩定，若循環伏安圖中峰電位差在80mv以下，則完成電極活化，否則將電極在濃度為0.2mol/L的KNO₃中記錄K₃Fe[(CN)₆]溶液的循環伏安曲線，掃描速度50mv/s，掃描范圍-0.1v～0.6v直至穩定，得到活化的玻碳電極；

3)在帶有冷凝裝置的250mL的圓底燒瓶中加入質量百分比為0.01％的氯金酸水溶液100mL加熱至沸騰，劇烈攪動下精確加入質量百分比1％的檸檬酸三鈉水溶液0.3～3mL，氯金酸水溶液在1～3min內由金黃色變為紫紅色，繼續煮沸10～20min，冷卻后以蒸餾水恢復到原體積，制得在可見光區最高吸收峰為220～525nm的納米金溶膠；

4)以Na₂HPO₄和CaCl₂為原料，在10℃～25℃條件下預冷1～2h后混合并攪拌均勻，然后加入由步驟3)得到的納米金溶膠和氧化石墨烯懸濁液各3～10mL，調節pH至3～5，并攪拌均勻，在10～25℃放置1～2h后，在100～160℃下水熱反應10～14h，抽濾洗滌后烘干，得到磷酸氫鈣-還原石墨烯/納米金顆粒混合物；

5)以步驟2)中得到的活化的玻碳電極為工作電極，將步驟4)中制得的磷酸氫鈣-還原石墨烯/納米金顆粒混合物滴涂在活化的玻碳電極表面，晾干再滴涂再晾干直至復合材料在工作電極達到飽和，用超純水沖洗干凈晾干，得到具有磷酸氫鈣-還原石墨烯/納米金顆粒混合物膜的基體電極；

6)向5mL的樣品管中依次加入10μL質量百分比濃度為2％的戊二醛水溶液、50μL pH值為7.0的PBS溶液和5mg尿酸酶，用Nafion溶液定容至500μL，混合，搖勻，得到尿酸酶混合液；

7)在步驟5)中得到的具有磷酸氫鈣-還原石墨烯/納米金顆粒的基體電極的表面滴涂20μL步驟6)中得到的尿酸酶混合液，晾干，待玻碳工作電極表面形成尿酸酶膜，即得到基于磷酸氫鈣-還原石墨烯/納米金顆粒的尿酸酶生物傳感器。

2.根據權利要求1所述的一種基于磷酸氫鈣-還原石墨烯/納米金顆粒的尿酸酶生物傳感器的制備方法，其特征在于：所述PBS溶液為0.1mol/L的NaH₂PO₄-Na₂HPO₄溶液。

3.根據權利要求1所述的一種基于磷酸氫鈣-還原石墨烯/納米金顆粒的尿酸酶生物傳感器的制備方法，其特征在于：所述Nafion溶液為全氟化高分子聚合物磺酸鹽陽離子交換劑。