[發明專利]CvBV5-3基因在降低果蠅免疫力和制備免疫低下型果蠅模型中的應用

有效

• 申請號: 201710520451.1
• 申請日: 2017-06-30
• 公開（公告）號: CN107287216B
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 陳學新;王澤華;時敏;黃健華;胡榮敏
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N15/34
• 分類號: C12N15/34;C07K14/01;C12N15/85;A01K67/033
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

本發明公開了CvBV5?3基因在降低果蠅免疫力和制備免疫低下型果蠅模型中的應用，該CvBV5?3基因是菜蛾盤絨繭蜂多分DNA病毒的35個基因組片段中的第5個環上的第3個基因，其堿基序列如SEQ ID NO.1所示。本發明利用轉基因技術，將菜蛾盤絨繭蜂多分DNA病毒基因CvBV5?3轉入果蠅基因組，獲得了穩定遺傳純合體的轉基因果蠅品系；該轉基因品系表達多分DNA病毒基因CvBV5?3后，存在血細胞凋亡的現象，并且在受到病原物侵染時，具有明顯的免疫力低的性狀，在對研究昆蟲免疫相關機制、增強人類免疫類藥劑的篩選等方面有重要意義。

技術領域

本發明涉及分子生物學和基因工程技術領域，尤其涉及CvBV5-3基因在降低果蠅免疫力和制備免疫低下型果蠅模型中的應用。

背景技術

昆蟲是目前地球陸地上最繁盛的物種類群，是人類取之不盡的資源寶庫。近年來，昆蟲的免疫在其基礎和應用研究方面受到極大關注，通過實驗來研究與昆蟲免疫相關的機制、信號等問題，對害蟲防治、益蟲防病、開發利用抗菌物、研究人類免疫機制等有著非常重要的現實意義。

果蠅屬于雙翅目、果蠅屬、果蠅科昆蟲，約1000種。其中，果蠅具有生活史短、易飼養、繁殖快、染色體少、突變型多、易于觀察等特點，被廣泛地用作遺傳和演化的室內外研究材料，是一種重要的模式生物。在生命科學發展的歷史長河中，果蠅扮演了十分重要的角色，是十分活躍的模型生物。隨著轉基因技術的發展，各種轉基因果蠅模型的應用也越來越廣泛。

目前，轉基因果蠅模型主要用于遺傳學的研究、發育的基因調控的研究、各類神經疾病的研究、帕金森氏病、老年癡呆癥、藥物成癮和酒精中毒、衰老與長壽、學習記憶與某些認知行為等研究中。

低免疫力果蠅模型在對研究昆蟲免疫相關機制、增強人類免疫類藥劑的篩選等方面有重要意義。但是，毒性較強的基因通常容易造成轉基因果蠅的死亡；因此，尋找合適的毒性基因是建立免疫低下型果蠅的重要環節。

而Polydnaviruses(多分DNA病毒，PDV)是一類寄生蜂專性共生的特殊病毒，主要包括兩個屬：分別是存在于膜翅目繭蜂科(Braconidae)的繭蜂病毒(Bracovirus,BV)與姬蜂科(Ichneumonidae)昆蟲體內的姬蜂病毒屬(Ichnovirus,IV)(Turnbull,M.and B.Webb(2002).Perspectives on polydnavirus origins and evolution.Advances in Virus Research,Academic Press.58:203-254)。PDV粒子隨雌蜂產卵時注入到寄生蜂的寄主體體腔內，首先侵染血細胞，隨后侵染所有組織。PDV作為寄生蜂的“強力武器”(Bai,S.,X.Chen,J.Cheng,W.Fu and J.He(2005).Effects of wasp-associated factors of Cotesiaplutellae on growth and development of Plutella xylostella larvae.Acta Phytophylacica Sinica 32(3):235-240)，其主要生理功能是抑制寄主的免疫(Dupuy,C.,E.Huguet and J.M.Drezen(2006).Unfolding the evolutionary story ofpolydnaviruses.Virus Research 117(1):81-89,Strand,M.R.and G.R.Burke(2012).Polydnaviruses as symbionts and gene delivery systems.Plos Pathogens 8(7))，卻不造成寄主的死亡，以保證寄生蜂的正常生長發育(Ye,X.,M.Shi and X.Chen(2014).Origin and character-istics of polydnaviruses carried by parasitoid wasps.Scientia Sinica Vitae 44(4):342)。菜蛾盤絨繭蜂多分DNA病毒(CvBV)是國內研究較多的一種多分DNA病毒，共有35個環狀DNA組成，編碼一百多個毒性基因。因此，有必要對CvBV基因做更進一步地深入研究。